ітин у багатьох випадках виявила хороші субстратні властивості для розмноження вірусів. І, нарешті, найбільш поширеними представниками цієї групи тканинних культур є одношарові первинні культури клітин. Культури клітин, вирощені на стінці скляних посудин, отримали широке застосування в різних дослідженнях [4]. Метод приготування первинних одношарових культур клітин тварин став звичайним у вірусологічній практиці. У таких культурах клітини розташовуються безперервним тонким шаром на поверхні скла і являють собою зручну модель для виявлення вірусів і вивчення їх біологічних властивостей. У цей час первинні одношарові культури займають провідне місце в приготуванні багатьох вірусних препаратів [5].
Одношарові культури
В даний час дезагрегацію тканин для приготування первинних культур проводять, як правило, ферментативним шляхом.
Важливе значення для отримання життєздатних клітин має швидке відділення клітин від диспергирующих розчинів, особливо при ферментативної обробці тканини через що збільшується проникності і крайньої нестійкості клітин. Крім того, джерелом ушкодження клітин можуть служити також продукти розпаду самих клітин, з яких найбільш небезпечні нуклеази.
З метою зменшення шкідливого дії ізольовані клітини відокремлюють центрифугуванням, а залишкова дія ферменту, адсорбованого клітинами, послаблюють промиванням або нейтралізують середовищем [7].
Первинні культури клітин зазвичай вирощують в скляних посудинах, закритих гумовими пробками. Клітини прикріплюються краще до м'яких сортів скла (що містить більше іонів натрію), ніж до твердим, типу пірекс. При фізіологічних значеннях рН клітини заряджені негативно, та їх зв'язок з негативно зарядженими центрами скла може здійснюватися за допомогою двовалентних катіонів (головним чином Са ++) [4].
Встановлено, що клітини в культурі утворюють макромолекулярні ексудати, які відіграють важливу роль у адгезії з субстратом і виборчої сортуванні клітин при реагрегаціі.
Прикріплення клітин до твердого субстрату не є жорстким і не виключає можливості їх пересування вздовж його поверхні.
На склі в відсутність контактів з іншими клітинами поверхню клітини знаходиться в безперервному русі.
Клітини тканин дорослих тварин прикріплюються до скла в меншій кількості, ніж клітини ембріональних тканин. З віком тварини здатність до зростання в культурі клітин різних тканин змінюється неоднаково.
Одношарові культури можуть бути отримані тільки при посіві певної кількості клітин на одиницю поверхні судини. Недостатня кількість клітин, так як надмірний надлишок їх, гальмує зростання культури. Для клітин багатьох тканин оптимальна посівна концентрація знаходиться в межах 2 - 5 год 10 5/мл.
Незважаючи на задовільний ріст клітин різних тканин в одношарової культурі, для культивування вірусу найчастіше використовують культури клітин ниркової тканини або культури клітин курячого ембріона. Вибір цих тканин обумовлений наступними причинами: легкої дезагрегації тканин трипсином; відносної невибагливості клітин до умов культивування; широким спектром чутливості до вірусів.
Незважаючи на загальні принципи вирощування свіже ізольованих клітин, в приготуванні одношарових культур клітин різних тканин тварин є деякі особливості.
Розроблено прийоми, що дозволяють найбільш ефективно одержувати і вирощувати клітини різних тканин тварин в первинній культурі. Такі розробки відносяться, насамперед, до приготування первинних культур клітин, які отримали широке застосування у виробництві біологічних препаратів. Однією з найбільш універсальних і вивчених культур є первинна культура клітин курячого ембріона.
2. Матеріали для приготування культури клітин
Сольовий розчин Хенкса містить солі натрію, калію, магнію і кальцію, а також глюкозу. Забезпечує збереження рН, осмотичного тиску в клітинах і відповідну концентрацію необхідних неорганічних речовин.
, 25% розчин трипсину використовували для дезагрегації тканини на окремі клітини.
Для отримання культури клітин використовували флакони для поживних середовищ та розчинів, колби для тріпсінізаціі, піпетки, чашки Петрі. Якість посуду має дуже важливе значення для успішного культивування клітин in vitro.
Посуд має бути стерильною і абсолютно чистою, тому що клітини дуже чутливі до токсичної дії мінімальних домішок сторонніх речовин.
Однією з обов'язкових умов успішної роботи з культурою клітин є висока якість води. Для ополіскування посуду використовують дистильовану воду.
Перед використанням по...
