освіти супероксиду в гребенях внутрішньої мітохондріальної мембрани. Пошкодження мітохондріальної ДНК веде до порушення синтезу білків - переносників електронів дихального ланцюга. Гальмування дихального ланцюга, у свою чергу, прискорює генерацію супероксиду і т.д. Зрештою, супероксиду утворюється досить для того, щоб виникла певна ймовірність окислення також і ядерної ДНК, хоча вона розташована набагато далі, ніж мітохондріальна ДНК, від генеруючої супероксид внутрішньої мембрани мітохондрій. [14]
2. Практична частина
. 1 Постановка експерименту
Насіння пшениці закладали в чашки Петрі, що містять розчин солей важких металів (Cu і Zn) різної концентрації. Ставили чашки на інкубацію при освітленості 2000 лк на 12-14 годин на день при температурі 23 - 25? C. Через 7 днів зробили необхідні виміри.
. 2 Методика експерименту
Визначення активності каталази.
Визначення активності каталази проводили за методикою CN Kumar, N.Knowles (1993) з модифікаціями. 1 м листової тканини розтирали з 10 мл 50мм фосфорного буфера (pH 7,0). Гомогенат фільтрували і центрифугували 10 хв при 8000 g. До 2,9 мл фосфорного буфера прилила 25 мкл отриманого ферментного екстракту і безпосередньо перед вимірюванням додали 90 мкл 3% перекису водню. Вимірювали на СФ - 46 при довжині хвилі 240 нм падіння оптичної щільності за 1 хв, і активність розраховували в моль/г наважки? хв за формулою:
де - падіння оптичної щільності- маса ткани- час, за який відбулося падіння оптичної щільності- коефіцієнт молярної екстінціі (E=39,4 мМ - 1см - 1). [15]
Визначення швидкості генерації супероксидного аніон-радикала.
В основі методу якого - здатність цього радикала окисляти адреналін в адренохром. Наважку молодого листя пшениці масою 300мг гомогенезіровалі з 15-ма мл дистильованої води. Потім, протягом 15 хв центрифугували при 3000 об/хв., Після чого брали рідину і розливали по трьом пробірках по 3 мл у кожну, після додавали 100 мкл розчину адреналіну (0,01%). Ставили пробірки на інкубацію при освітленості +2000 лк на 45 хв. Після закінчення часу вимірювали оптичну щільність утворився адренохрома проти гомогенату з водою на спектрофотометрі СФ - 46 при довжині хвилі 480 нм, а отримані дані підставляли у формулу:
де C - концентрація, D - оптична щільність,?- Коефіцієнт молярної екстинкції (+4020 М - 1? См - 1), m - маса наважки - 300 мг, t - час інкубування (45 хв.). [16]
Отримані дані піддавали стандартному статистичному аналізу. Достовірність відмінностей обговорювалася при підрахунку помилки.
.3 Результати експерименту
Таблиці і діаграми
Дані активності каталази.
Каталаза широко поширена в рослинних тканинах. Вона виявлена ??у всіх аеробно дихаючих клітинах і у деяких факультативних анаеробів. Подібно пероксидазе і цитохромоксидази каталаза відноситься до Fe-порфириновая ферментам. [13]
У даній роботі визначення активності каталази проводилися через тиждень після висадки насіння пшениці в розчин, що містить солі важких металів у різних концентраціях.
Таблиця 1
ТМСреднее значення активності каталази за три дні експерименту, ммоль/г? мін.Контроль0,073 ± 0,011Zn2 + 1 мМ0,12 ± 0,017Zn2 + 10 мкМ0,075 ± 0,01Cu2 + 1 мМ0,195 ± 0,024 Cu2 + 10 мкМ0,111 ± 0,012
Ряд показових діаграм.
Діаграма 1
Діаграма 2
Діаграма 3
Дані концентрації супероксидного аніон-радикала в рослини після проведених дослідів.
Ключовий активною формою кисню є супероксид аніон-радикал (О2.), що утворюється при приєднанні одного електрона до молекули кисню в основному стані. Супероксид радикал сам по собі має малу реакційною здатністю і у водному середовищі може спонтанно дісмутіровать. Час його життя в біологічних субстратах становить близько 10-6 с. При кислих значеннях рН супероксид аніон-радикал може протонированная з утворенням більш реакційно-здатного пероксільной радикала. [17]
У даному експерименті з визначення швидкості генерації супероксидного аніон-радикала, вимірювання проводилися через 7 діб після висадки насіння в розчин, що містить солі важких металів у різних концентраціях.
Таблиця 2
ТМСреднее значення швидкості генерації супероксидного аніон-радикала за три дні експерименту, мкмоль/г? мін.Контроль14,38 ± 1,79Zn2 + 1 мМ27,32 ± 2,3Zn2 + 10 мкМ20,84 ± 1,43Cu2 + 1 мМ31 ± 1,5Cu2 + 10 мкМ23,04 ± 1,45
Ряд показових діаграм.
Діаграма 4
