tify"> Обладнання. Конічні колбочки місткістю 50 мл; мікробюретки. p align="justify"> Матеріал. Сироватка крові. p align="justify"> Метод заснований на здатності мурексиду утворювати з іонами кальцію в лужному середовищі комплексні сполуки, забарвлені в червоно-фіолетовий або блідо-рожевий колір (залежно від концентрації). При титруванні розчином сильнішого комплексообразователя (комплексон III) це комплексне з'єднання руйнується і пов'язаний мурексид знову звільняється, що призводить до появи його натуральної забарвлення (фіолетовою або блідо-бузкової). Обсяг комплексона III, який пішов на титрування, пропорційний вмісту кальцію в сироватці крові. p align="justify"> Хід визначення. У конічну колбу вносять 50 мл дистильованої води, 0,4 мл розчину гідроксиду натрію, на кінчику скальпеля мурексид і ретельно перемішують скляною паличкою. З'являється блідо-бузкова забарвлення, обумовлена ​​кольором самого індикатора. p align="justify"> Відбирають 25 мл отриманого розчину в колбу для титрування (залишився розчин служить еталоном порівняння) і додають 0,5 мл сироватки крові, при цьому з'являється блідо-рожеве забарвлення, обумовлене утворенням кальцієво-мурексидної комплексу.
Суміш титрують розчином комплексона III до первісної забарвлення індикатора. Кінець титрування контролюють, зіставляючи забарвлення дослідної проби з еталоном (невикористана частина розчину). p align="justify"> Розрахунок. Вміст кальцію розраховують за формулою
V72
х = ----------,
40? 0,5 ​​
де х - вміст кальцію в сироватці крові, ммоль/л; - об'єм розчину комплексона III, який пішов на титрування, мл;
, 5 - об'єм сироватки, взятий на дослідження, мл;
- коефіцієнт перерахунку кількості кальцію на +1 л сироватки з урахуванням еквівалентності комплексообразователя;
- молекулярна маса кальцію.
Оформлення роботи. Розрахувати вміст кальцію в сироватці крові (в ммоль/л), порівняти з нормою і зробити висновок. p align="justify"> Практичне значення роботи. У нормі вміст кальцію в сироватці крові становить 2,25-2,75 ммоль/л. Гіперкальціємія спостерігається при гіпервітамінозі D, гіперпаратироїдизмі, при серцевій недостатності, жовтяниці. Гіпокальціємія зустрічається при спазмофілії, рахіті, хронічних захворюваннях нирок, гіпопаратиреоїдизмом і т.д.
Робота 92. Тимолова проба за Хуерго і Поппер
Реактиви. 10%-ний спиртовий розчин тимолу *; буферний розчин *; тімолововероналовий буфер *; стандартний розчин *. p align="justify"> Обладнання. Штатив із пробірками; піпетки на 0,2 і 10 мл; фотоелектроколориметр. p align="justify"> Матеріал. Досліджувана сироватка крові. p align="justify"> Метод заснований на взаємодії білків сироватки крові з тимолового-вероналовим буфером, при цьому з'являється мутність внаслідок утворення глобулін-тимолом-фосфоліпідного комплексу.
Хід визначення. До 6,0 мл тимолового-вероналового буферного розчину додають 0,1 мл негемолізірованной сироватки, залишають стояти 30 хвилин, потім фотометрують при 660 нм проти буферного розчину в кюветах з товщиною 10 мм. Реакцію проводять при температурі +25? С. Розрахунок ведуть за калібрувальною кривою. p align="justify"> Примітка. Для отримання точних даних важливим є взяття крові натще: аліментарна гіперліпемія істотно впливає на результати дослідження. При постановці проби може використовуватися сироватка, що зберігалася протягом декількох днів. Помірний гемоліз не відбивається на результатах дослідження. p align="justify"> Розрахунок. За отриманою величиною екстинкції за калібрувальним графіком проводять визначення величини тимолової проби. p align="justify"> Побудова калібрувального графіка. З стандартного розчину готують розведення, відповідне одиницям помутніння по SH. Так, 1,35 мл суспензії і 4,65 мл 0,2 н сірчаної кислоти відповідає 5 SH помутніння; 2,70 мл суспензії і 3,30 мл кислоти - 10 SH; 5,40 мл суспензії і 0,60 мл кислоти - 20 SH помутніння.
Разведения змішують, добре струшують і фотометрують при довжині хвилі +660 нм (630-690 нм - червоний світлофільтр) проти води в кюветах на 10 мм. За отриманими даними будують калибровочную криву
Оформлення роботи. Після визначення величини тимолової проби за отриманими даними зробити висновок про можливі зміни і причини їх відхилень. p align="justify"> Практичне значення роботи. У нормі становить 0-4 од (SH). Тимолова проба більш придатна для функціонального дослідження печінки. Вона позитивна при хвороби Боткіна, при токсичному гепатиті, колагенових захворюваннях, малярії та вірусних інфекціях. При механічній жовтяниці проба негативна, що має диференційно-діагностичне значення. p align="justify"> Робота 93. Сулем...
