ічних процесів призводить до порушення колоїдної стійкості білків. Зрушення коагуляционной стрічки вправо (на освіту пластівчастого осаду пішло менше 0,4 мл CaCl2), обумовлений підвищенням вмісту ? - глобулінів в сироватці крові, спостерігається при пошкодженні печінки (гепатит, цироз, дистрофія), гемолізі і хронічних запальних процесах (пневмонія, туберкульоз, остеомієліт, пієлонефрит, ревматизм та ін.) Зрушення коагуляционной стрічки вліво (на освіту пластівчастого осаду пішло більше 0,5 мл CaCl2), обумовлений збільшенням вмісту сироваткових ? - і ? - глобулінів, відзначається при гострих запальних і ексудативних процесах (ревматизм, туберкульоз), цукровому діабеті, ураженні нирок і злоякісних пухлинах.
Робота 90. Визначення активності ? - амілази в сироватці крові амілокластіческім методом
Реактиви. Крохмаль, 20 г/л розчин; фосфатний буфер, 0,1 М розчин з рН 7,2; натрію хлорид, 30 г/л розчин; соляна кислота, 1 М розчин; йод, 0,1 М розчин в 30 г/л розчині йодиду калію.
Обладнання. Водяна баня; термостат, відрегульований на 37? С; штатив із пробірками; піпетки місткістю 1 мл; мірні колби місткістю 50 мл; ФЕК. p align="justify"> Матеріал. Сироватка крові. p align="justify"> Метод заснований на фотометричному визначенні убутку крохмалю в ході реакції гідролізу його ? - амилазой сироватки крові. Різниця концентрацій крохмалю до і після гідролізу пропорційна активності ферменту.
Хід визначення. У дві пробірки, дослідну і контрольну, вносять по 0,5 мл розчинів крохмалю, по 0,3 мл фосфатного буфера і по 0,1 мл розчину хлориду натрію. Вміст перемішують струшуванням і поміщають на 10 хв у водяну баню при 37? С.
В дослідну пробу додають 0,1 мл сироватки крові, а в контрольну 0,1 мл розчину соляної кислоти і потім 0,1 мл сироватки крові. Ретельно перемішують суміш в пробірках і ставлять проби на 30 хв у термостат при 37? С.
По закінченні інкубації в дослідну пробірку додають 0,1 мл розчину соляної кислоти і швидко перемішують вміст струшуванням - реакція зупиняється.
Відбирають по 0,2 мл вмісту обох пробірок і переносять у дві мірні колби на 50 мл. Доливають у них по 40 мл дистильованої води і по 0,5 мл розчину йоду в йодиді калію. Перемішують і доводять об'єм до мітки дистильованої води. p align="justify"> Отримані розчини негайно фотометрують на ФЕК проти води при 630-690 нм (червоний світлофільтр) в кюветі з товщиною шару 1 см.
Примітка. Досвідчені та контрольні проби повинні мати однакову температуру, так як її зміна позначається на інтенсивності забарвлення йод-крохмального розчину. p align="justify"> Розрахунок проводять за формулою
(Ек - Еоп) 0,01? 2? 1000
х = ----------
Ек0, 1
де х - активність амілази сироватки крові, р/(ч? л),
Ек - екстинкція контрольної проби;
Еоп - екстинкція дослідної проби;
, 01 - маса крохмалю в пробі, г;
- перерахунок на 1 год інкубації;
- коефіцієнт перерахунку на +1 л сироватки крові;
, 1 - об'єм сироватки крові, взятої на дослідження, мл.
Оформлення роботи. Розрахувати активність ферменту, порівняти її з нормою і зробити висновок. p align="justify"> Практичне значення роботи. У нормі активність амілази сироватки крові, певна амілокластіческім методом, становить 15-30 г/(год? Л). Джерелом сироваткової амілази служать підшлункова залоза і слинні залози. У здорової людини кількість слинної і панкреатичної амілази приблизно однаково. Зростання активності амілази крові (гіперамілаземія) спостерігається при гострому панкреатиті, коли вона підвищується в 10-30 разів, досягаючи максимуму через 24 годин після початку захворювання, і потім поступово приходить до норми на 2-6-й день. При хронічних панкреатитах гіперамілаземія помірна. Вона зустрічається також при ураженні слинних залоз. Гіпоамілаземія відзначається при нестачі зовнішньосекреторної функції підшлункової залози, захворюваннях печінки (гепатит, цироз, інтоксикації), розладах харчування (токсичні диспепсії), цукровому діабеті і т.д.
Робота 91. Визначення вмісту кальцію в сироватці крові мурексидної методом
Реактиви. Комплексон III, 0,665 грама/л розчин; гідроксид натрію, 9 М розчин; мурексид, розтертий у тонкий порошок з NaCl у співвідношенні 1:50. p align="jus...
