. Вміст шлунково-Кишково тракту змішують бідістільованою водою, етиловий спиртом и соляної кислоти в співвідношенні 10: 5: 10: 2 і через 10 хвилин фільтрують через паперовий фільтр. До 5 мл фільтрату додаються 1 мл насіченого Розчин тетраетілтіурамдісульфіду в етиловий спірті. З'явилися темно-зеленого забарвлення свідчіть про скроню концентрацію МІДІ. Як додатковий тест Використовують реакцію з жовто дах яною сіллю. Для цього в пробірку вносячи 1мл фільтрату, 5 крапель концентрованої оцтової кислоти й 5 крапель 5% розчин фероціаніду калію. У прісутності МІДІ з являється червоно-коричневого забарвлення або облог у результате Утворення колоїдного фероціаніду МІДІ.
Кількісна проба. Принцип методу базується на мінералізації біоматеріалів мінеральними кислотами з подалі фотоелектроколоріметрічнім визначенням МІДІ за реакцією з тєтраетілтіурамдісульфідом при 435нм.
Приготування реактівів.
. 0,1М розчин комплексона ІІІ: 16,81г реагенту розчіняють бідістільованою водою в мірній колбі на 500 мл и доводять до Мітки.
. Розчин МІДІ стандартний основному, 1 мг/мл; 67,31 мг CuCl2 х 2Н2О або 98,91 мг CuSO4 x 5H2O розчіняють у мірній колбі місткістю 25 мл, куди Попередньо додаються 1 мл концентрованої хлорістоводневої кислоти. Малозначні що доводять до Мітки водою, перемішують и зберігають у холодильнику.
. Розчин МІДІ стандартний робочий, 5 мкг/мл: готують розчіненням основного Розчин бідістільованою водою в 200 разів. Розчин Стійкий течение тижня.
. Розчин тетраетілтіурамдісульфіду (ТМТД) в етанолі: в мірну колбу на 100 мл вносячи 0,25г препарату, додаються 90 мл етанолу и нагрівають до кіпіння. После охолодження Розчин об'єм доводять до Мітки спиртом и декантують від облогу.
Підготовка посуд та матеріалу. У колбу чі Інший посуд вносячи 1 мл етилового спирту и 10 мл концентрованої азотної кислоти. После бурхлівої Реакції, яка супроводжується віділенням окіслів азоту, посуд вітрімують 30 хв. при кімнатній температурі. Потім промівають дістільованою водою и сушать при 110 °. Перед ЗАСТОСУВАННЯ посуд ополіскують бідістільованою водою.
Досліджуваній сухий зразок вагою 50-100г подрібнюють у Млинки. Органи та тканини тварин, патматеріал подрібнюють ножиць, а потім гомогенізують, вікорістовуючі пластмасові склянки. Рідкі зразки перемішують струшуючі течение 1 хвилини.
Середній сухий зразок корму масою 1 г, сірої печінкі - 0,5 г або крови (сироватки) про ємом 2,0мл переносячи у круглу колбу ємкістю 100мл, додаються 10мл концентрованої азотної кислоти и 0,2 етилового спирту. После пріпінення бурхливого віділення окіслів азоту колбу вітрімують на піщаній бані до просвітлення гідролізату и розчінення ОСНОВНОЇ масі матеріалу. Потім вносячи 5мл 57% хлортстоводневої кислоти и посілюють нагрівання. Розкладання матеріалу продолжают до з'являться білих парів хлорного ангідріду. Если в момент кіпіння хлорістоводневої кислоти розчин пріймає коричневого забарвлення (обвуглюється), швидко вносячи 5-10 крапель азотної кислоти и вновь що доводять до віділення хлорного ангідріду. На кінцевій Стадії гідролізу нагрівання зменшуються, а мінералізаті вітрімують 5 хвилин на піщаній бані. После охолодження вмісту Колбі додаються бідістільовану воду в об ємі 14 мл. Паралельно проводять контрольний дослід на чистоту реактівів.
Побудова каліброваного графіка. У Колбі місткістю 100мл вносячи 0,5; 1; 2; 3мл РОбочий стандартного Розчин МІДІ (5 мкг/мл) i по 5 мл 57% хлорістоводневої кислоти. Малозначні Розчин доводящего бідістільованою водою до 14 мл. Потім вносячи 1 мл 0,1М розчин комплексона Ш, 13 мл етилового спирту і 4 мл насіченого Розчин Тетурамом в спірті. После змішування розчин вітрімують при кімнатній температурі 30 хв., Потім переносячи у кювету з товщина шару 20мм и вімірюють оптичні Густин при 435нм (синій світлофільтр).
Хід АНАЛІЗУ. До гідролізату про ємом 14 мл додаються 1 мл 0,1М розчин комплексона Ш и 3 мл етилового спирту. Через 5 хвилин при появі облогу солей розчин фільтрують через паперовий фільтр у мірну колбу або циліндр ємкістю 50 мл. Облог на фільтрі промівають 1% розчин соляної кислоти, доводячі до початкових про єму. Потім, помішуючі, вносячи 4 мл насіченого Розчин Тетурамом в етанолі. Колбі вітрімують при кімнатній температурі 30 хвилин. Подальші дослідження віконують, як и при побудові каліброваного графіка.
одержании водно-спиртовий розчин переносячи у кювету з Товщина граней 20мм и вімірюють его оптичні Густин при 435нм. Для порівняння розчінів ставлять контрольний дослід на вміст МІДІ в реактивах, включаючі стадію мінералізації. Если оптичні Густина досліджуваного бланках более оптічної Густин максимального стандарту (15мкг), розводять забарвленій водно-спиртовий розчин 10% ...
