цілому гідрофільного білка. Інший спосіб полягає в кон'югації білка або пептиду з ліпідом.
Крім того, для створення частинок шуканий de novo вимагається ліпідні складові, найчастіше фосфоліпіди. Найбільш кращим фосфоліпідом є фосфатидилетаноламін. Використання фосфатидилхоліну замість фосфатидилетаноламін призводить до утворення шуканий-подібних частинок з більш низькою щільністю, гетерогенних за розміром і морфології. Шуканий можуть утворюватися і без фосфолипида, але його присутність необхідна для включення антигену.
Зазвичай до складу шуканий входить 60-70% Quil A, 10-15% холестерину і фосфолипида і 5-20% білкового антигену. Основу шуканий складають утворюються в результаті взаємодії сапонінів з холестерином глікозид-холестеринові комплекси.
На початку 60-х років минулого століття на електронних знімках було зареєстровано освіту округлих шуканий-подібних пор розміром близько 20-30 нм на еритроцитарних і ліпосомальних мембранах, що містять холестерин при впливі на них сапонінів з Q. saponaria. Пізніше було показано, що глікозиди голотурій утворюють аналогічні структури в мембранах, що містять холестерин. Це побічно свідчить про те, що глікозиди голотурій також здатні формувати позовом. Для пояснення мембранолитического активності сапонінів (тритерпенових і стероїдних глікозидів) була запропонована модель пори, яку формують мономірні глікозид-холестеринові комплекси.
Малюнок 2. Структура позовом.
Під електронним мікроскопом негативно контрастували препарати шуканий виглядають як сферичні агрегати, що складаються з 20 субодиниць з чорними дірами в центрі (рис.2) (Kersten GFA 2003). З чого був зроблений висновок, про те, що субодиниці - це кільцеподібні міцели з часом посередині. Кільце міцели утворено монослоем з чергуються молекул Quill A, холестерину і фосфолипида.
Співвідношення між ними визначає поведінку агрегату. Завдяки тому, що в молекулах Quill A по обидві сторони від гідрофобного аглікона розташовуються дві вуглеводні ланцюжки, один з яких містить залишок глюкуронової кислоти, міцели і самі шукані при нейтральній рН заряджені негативно. Електростатичне відштовхування сприяє підтримці колоїдного стану позовом. Поведінка агрегату залежить від співвідношення Quill A: ліпіду. При високому співвідношенні (більше 4, за масою) утворюються окремі міцели, оскільки досить велика кількість вуглеводних груп Quill A екранують їх зовнішню поверхню. Зниження кількості Quill A призводить до агрегації міцел в результаті збільшення гідрофобності їх поверхні. Присутність фосфатидилетаноламін також сприяє більш пухкої упаковці мицелл всередині позовом.
Спосіб дії.
Спосіб дії шуканий у складі вакцин, насамперед, визначається присутністю в них Quill A, хоча досі не відомий точний механізм його ад'ювантного дії. Цікаво, що мицеллярний розчин Quill A проявляє менший ад'ювантний ефект порівняно з позовом. Сильна гемолітична активність Quill A ймовірно пов'язана з утворенням комплексів з мембранним холестерином. Це в свою чергу викликає запальну реакцію в місці введення позовом, до якого залучаються лімфоцити і макрофаги («ефект депо»). Але місцева запальна реакція можливо не єдина причина ад'ювантної активності, оскільки запальну реакцію можна усунути без втрати ад'ювантної активності додаванням ліпосом, що містять холестерин. In vitro шуканий викликають такий же імунну відповідь, що і ліпосоми або інтактні віруси. Але гуморальну відповідь, який викликають шуканий in vivo, в 20 і 60 разів вище в порівнянні з ліпосомами і інтактними вірусами відповідно.
Важливою особливістю дії позовом на організм тварин є підвищений рівень антитіл, а також сильний Т-клітинну відповідь, рестріктірованний як по МНС-I, так і по МНС-II класам. Зокрема, ця дія була показано на мишах з використанням різних вірусних антигенів. Причому стимуляція Т-клітин типу Th1 супроводжується утворенням інтерлейкіну - 2 та інтерферону (IFN-?). Шуканий також стимулюють синтез інтерлейкіну - 1 спленоцитах мишей, який, у свою чергу, сприяє залученню нейтрофілів до місця ін'єкції позовом і спонтанної проліферації спленоцитів. Парентеральная імунізація за допомогою шуканий викликала широке коло ефекторних імунних реакцій, включаючи всі класи IgG і клітинноопосередковані імунні відповіді, такі як гіперчутливість уповільненого типу in vivo, антиген-специфічний проліферативний відповідь і продукція цитокінів in vitro. У різних роботах були детально розглянуті специфічні CD4 + -залежні імунні відповіді, які сполучені з Th1- і Th2-залежними ефектами, що видно і по IgG изотипам, і по продукції інтерлейкінів.
Перспективи модифікації складу позовом.
шуканий являють собою гнучку конструкцію, будь-який компонент якої, в принципі, може бути заміщений іншим з...
