ивания хроматограми в УФ-світлі її обробляють реактивом Драгендорфа (Bil3 в KI) або парами йоду. Кумарини проявляються у вигляді плям, забарвлених в коричневий колір.
У першу чергу, проводять колоночную хроматографію з використанням різних сорбентів і систем розчинників. (5)
Так, для розділення гідрокси-і алкоксікумарінов, заміщених у бензольному циклі, пропонується застосовувати колонку, заповнену силікагелем, і проводити послідовне елюювання гексаном, сумішшю гексан - хлороформ (із збільшенням концентрації хлороформу), сумішшю хлороформ - метанол (9:1; 8:2; 7:3) або сумішшю хлороформ - етанол (97:3). В інших випадках для цих же цілей беруть оксид алюмінію і суміш етилацетат - бензол (2:1) або бензол, силікагель і системи: хлороформ - бензол (1:1), хлороформ, хлороформ - етанол (98:2; 99:1; і т.д. до 90:10), бензол - бутанол (4:1; 3:1). Для розділення 4-феніл, 4-н-пропілкумарінов і 4-н-пропіл-піранокумаріни використовують силікагель і елююють послідовно системами гексан - етилацетат (градієнт), метанол - вода - дихлоретан, гексан - ацетон.
Фурокумаріни фракционируют на оксиді алюмінію (III ступінь активності) за допомогою петролейного ефіру, суміші петролейний ефір - хлороформ (2:1), хлороформу, суміші хлороформ - етанол (9:1, 4:1, 2:1), а також на силікагелі - суміші гексан - хлороформ і хлороформ - етанол з поступовим збільшенням вмісту більш гідрофільного компоненту.
Про присутності кумаринів свідчить характерна флуоресценція в УФ-світлі окремих зон сорбенту, що містять ці сполуки, або ж позитивний ефект хімічних реакцій, що проводяться з Елюат.
При слабкому спорідненості речовини до сорбенту необхідно використовувати активні верстви і слабополярной розчинники, а при сильному - малоактивні шари і сільнополярних розчинники. Зокрема, кумарини з фенольними або спиртовими гідроксилом активніше сорбуються на окису алюмінію і елюіруются великими обсягами полярних розчинників (етанол), іноді з додаванням 0,5% оцтової або хлористоводневої кислоти; метиловані похідні та піранокумаріни слабкіше утримуються на сорбенті. У процесі елюювання доцільно поступово замінювати гідрофобні розчинники гідрофільними.
Для поділу суми кумаринів, у тому числі при їх поєднанні з іншими низькомолекулярними БАР, їх очищення та аналізу в даний час запропонована колонкової хроматографії з використанням сорбентів афінного типу на основі фенольних та поліфенольних лігандів. Рекомендовані епоксіактівірованние сорбенти з матрицею HW-35, що містить резорциновими і катехінові ліганди. В якості рухомої фази використовуються вода, водні розчини етанолу, мінеральних кислот, нейтральних солей і різних їх поєднань. Встановлено, що при використанні даних типів сорбентів результати значно перевершують ті, які були отримані при використанні класичних кремнеземних, поліамідних і декстранових сорбентів.
Контроль за ефективністю колонкової хроматографії здійснюється з використанням паперовій (БХ), а частіше - тонкошаров...
