і дані про початкові швидкостях реакції і початкових концентраціях субстрату за наявності інгібітора в зворотні величини, занесемо їх у таблицю 17 і побудуємо графік в даних координатах (рис. 16).
Таблиця 17
1/cs, 0, 1/мМ0, 020,0180,0130,0090,0060,0041/w0, с/мкМ0, 0330,0300,0250,0200,0170,015
В
Рис. 16 - Залежність початкової швидкості реакції від початкової концентрації субстрату в подвійних зворотних координатах за наявності інгібітора (1) і його відсутність (2)
Обробка даних в подвійних зворотних координатах:
реакція без інгібування;
реакція з інгібуванням.
За отриманого розташуванню прямих на рис. 16 можна зробити висновок про те, що дане інгібування відноситься до неконкурентною. Неконкурентний інгібітор не заважає зв'язуванню субстрату з ферментом. Він здатний приєднуватися як до вільного ферменту, так і до фермент-субстратному комплексу з однаковою ефективністю. p align="justify"> Виходячи з джерела, схема неконкурентного інгібування:
(16)
? (17) + I? ESI (18)
Причому: , K '= .
Якщо обидва комплексу неактивні, тобто не дають продукту, а константи їх дисоціації рівні між собою: K1 = K ', то це рівносильно додатковій умові: інгібітор не заважає взаємодії субстрату з ферментом, але зменшує швидкість реакції через неактивність комплексів, що утворюються на поверхні ферменту.
Вираз для початкової швидкості реакції представимо у вигляді:
wo, I = (19), де, еф = . (20)
В
Рис. 17 - Залежність початкової швидкості реакції від початкової концентрації субстрату в подвійних зворотних координатах за наявності інгібітора (2) і його відсутності (1)
З виразу (19) видно, що при такому типі інгібування змінюється гранична швидкість процесу, а константа Міхаеліса залишається постійною. З останнього співвідношення можна отримати вираз для константи інгібування:
, (21)
яке показує, що константу інгібування легко обчислити при відомій початковій концентрації інгібітора, вимірюючи швидкості реакції в відсутність і в присутності інгібітора.
За умовою завдання cI, o = 40мкм.
Прочитуємо дані з графіка 16 і знаходимо:
0, 0049 * 106; wmax = 204, 1 * 10-6.
0,0103 * 106; wmax, еф. = 97, 09 * 10-6. br/>
Константа Міхаеліса зал...
