озчину).
Стрептокіназа. В експериментах використовувався очищений білок Streptokinase from hemolytic Streptococcus (PN S3134), активність> 4200МЕ/мг (Sigma, Saint Louis, MO). p align="justify"> Підготовка плазми. Людська кров здорових донорів була надана гематологічному науковим центром РАМН. Використовувався пул плазми 4 здорових донорів. У кров був доданий 3.8% цитрат натрію (pH 5.5) в об'ємному відношенні кров/антикоагулянт 9:1, а також доданий тріпсіновий інгібітор контактної активації в кінцевій концентрації 0.4 г/літр для інгібування контактного шляхи активації згортання. Після попереднього відділення еритроцитів центрифугуванням протягом 15 хвилин при 1600g, плазму центрифугують 5 хвилин при 10 000g для видалення тромбоцитів. Отримана таким чином вільна від тромбоцитів плазма містить 15-70 мкМ іонів вільного кальцію, а концентрація тромбоцитів у ній не перевищує 10 9 клітин/літр.
Плазма дефіцитна по XI фактору: Заморожена плазма (Affinity biologicals, Ancaster, Ontario).
Плазма дефіцитна по IX фактору: Заморожена плазма (Precision biologics, Westlake Village, CA).
Фібриноген: Очищений білок Fibrinogen from human plasma (Sigma, Sant Louis, Missouri). M = 340кД. p align="justify"> Протромбін: Очищений білок factor II from human plasma (Sigma, Sant Louis, Missouri).
Методи
Відеомікроскопи. Експерименти проводилися на системі за Відеомікроскопи [51], [52], схема якої представлена ​​на рис.5. Для запобігання контактної активації та стабілізації рН плазми протягом експерименту (при контакті з повітрям з плазми виходить СО 2 , внаслідок чого змінюється іонний склад плазми і її рН) за 10 хвилин до проведення експерименту в плазму додавали КТВ в кінцевій концентрації 0.2 мг/мл в буфері з HEPES (pH 7.4). Підготовлена ​​плазма інкубується 10 хв при 37 В° C для запобігання холодової активації згортання. Потім проводиться рекальціфіцікація плазми і додається тромболітичної препарат. Кінцева концентрація ТПА досягала 1.5, 2.5, 5, 10, 20, 30, 40 мкг/мл [53], [54], концентрація урокінази становила 180МЕ/мл [53], стрептокінази - 200МЕ/мл [53], також проводилися контрольні експерименти, без додавання тромболітичні препаратів. Отриманий розчин заливається в кювету, в яку вставляється активатор згортання, покритий тканинним фактором згортання. Кювета з зростаючим згустком висвітлюється червоним світлом і протягом 90 хв реєструється зміна інтенсивності світлорозсіювання згустку. При утворенні згустку плазма крові переходить з рідкого в гелевидний стан, і внаслідок цього процесу відбувається зміна інтенсивності світлорозсіювання плазми.
В
Рис.5. Схема установки: Встановлення складається з дослідницької кювети (1)...
