Для детекції ДНК-ампліфіката в ультрафіолеті (?=260 нм) використовували 0,1% розчин бромистого етидію в 1xTBE. Експозиція гелю в розчині перед аналізом становила 10-12 хвилин. Завдяки високочутливої ??фотокамері, асоційованої безпосередньо з трансілюмінатора, можливо фотографувати і зберігати зображення для подальшого його аналізу.
3. Результати та обговорення
.1 Детекція наявності продукту в пробах
На представлених знімках (Малюнок 1) можна бачити світяться в ультрафіолетовому випромінюванні смуги, що означають наявність продукту - ампліфікона ГСТТ1 довжиною 480 пар основ.
(a)
(b)
(c)
Малюнок 1. - Результати електрофоретичного аналізу продуктів ПЛР в ультрафіолеті (?=260 нм)
Всього було виявлено 28 позитивних результатів по наявності кон'югується варіанту гена ГСТТ1, і 16 негативних. Позитивний результат означає наявність в пробі кон'югується типу гена ГСТТ1, негативний - гомозиготність досліджуваного генотипу по нульовому аллелю гена ГСТТ1.
.2 Статистична обробка результатів практичної частини
Для визначення внеску поліморфізму гена ГСТТ1 в захворюваність різними видами ракових захворювань необхідно провести статистичний аналіз, який показує, чи є відмінності в групі дослідження і контрольній групі статистично значущими. Для цього необхідно розрахувати значення відносних шансів, які характеризують ризик розвитку захворювання у людини з даними Поліморф гена ГСТТ1, і параметра??, Який є аналогом дисперсійного аналізу для якісних ознак.
Якщо показник відносних шансів, розрахований для групи дослідження, перевищує одиницю, то при рівні значущості 0, 05 відмінності можна вважати статистично значущими, тобто варіант гена впливає на захворюваність.
??- Ще один параметр, що дозволяє оцінити внесок поліморфа гена в захворюваність. Розподіл?? стійко при підсумовуванні, що дозволяє використовувати його при мета-і статистичному аналізі. Крім того, цей параметр дозволяє порівнювати розподілу частот незалежно від того, розподілені вони нормально чи ні. [18]
Порівняння двох поліморфних варіантів гена ГСТТ1 являє собою таблицю 2х2, де очікувані значення виявляться завищеними, що призведе до того, що нульова гіпотеза буде відкинута навіть за умови її істинності. Тому дана нами формула наводиться з поправкою Йейтса.
Таблиця 1 - Співвідношення кількості захворілих і здорових людей в групі дослідження і групі контролю залежно від поліморфа ГСТТ1
Варіант генаГруппа ісследованіяГруппа контроляОШДІ (95%)?? ГСТТ1 +820135,07 - 39,9314,73 ГСТТ1-15037, 5Всего2320 Позначення: ГСТТ1 + гомо-або гетерозигота по ненульовому аллелю ГСТТ1.
ГСТТ1 - гомозигота по нульовому аллелю ГСТТ1
Виходячи з показника ОШ, який складає 37,5 що значно перевищує одиницю, навіть з урахуванням довірчого інтервалу, а також показника??, який також перевищує табличне значення (3,841 для рівня значущості 0,05), можна сказати, що гомозиготність по ГСТТ1 (0/0) є фактором ризику для розвитку онкозабол...
