ня и явіщем Надзвичайно великих вакуолізуванням клітін;
) фазу деградації клітін з Пітом швідкістю зростанню, что пріймає негативне значення. Форма реальних ростових кривих может значний відрізнятіся трівалістю фаз від модельної. Процеси ростового циклу залежався від виду рослини, кількості внесеного матеріалу и умів культівування (склад жівільного середовища, температура, Початкове значення рН, склад газової фази, ШВИДКІСТЬ перемішування). Первинний и вторинно метаболізм культівованіх клітін рослин відоспеціфічній, поклади від типу діференціювання вихідних клітін рослини и регулюється умів вирощування. Генетична мінлівість клітін як наслідок їх культівування поза організмом, знікнення одних и з'явилися других стійкіх ознакой, что передаються у ряді клітінніх поколінь, виробляти до Виникнення з первинної калусної тканини генетично и фенотіпічно розрізняються ліній клітін. Це дозволяє відібраті або создать експериментально Лінії, что зберігають біосінтетічні системи, характерні для віхідної рослини, и Лінії, что сінтезують принципова Нові Речовини. Культівування ОКРЕМЕ клітін Джерелом ОКРЕМЕ (одиночні) клітін є клітінні суспензії в рідкому жівільному середовіщі, мацерація тканин рослин, ізольованої протопластах после Відновлення ними клітінної стінкі. Причем ізольовані протопласти є ідеальнімі ОКРЕМЕ клітінамі. Культівування ОКРЕМЕ клітін дозволяє отрімуваті клони и досліджуваті генетичну и фізіологічну стабільність чі мінлівість при вірощуванні клонового матеріалу. ОКРЕМІ Клітини Важливі для клонової селекції мутантних, гібрідніх, трансформованої ліній. Зазвічай в ЦІ Клітини вводящая маркерні гени або створюють маркерні ознакой для забезпечення селективності умів відбору. Мацерованної Клітини тканини рослини є Гарньє моделлю для порівняльного Вивчення фізіологічних процесів в тканини и відслушною клітіні. Вместе с тім при культівуванні ціх клітін на середовіщі, стімулюючої поділ клітін, смороду діференціюються и утворюють калусні Клітини. Для Отримання ОКРЕМЕ мацерованної клітін Використовують СПЕЦІАЛЬНІ мацеріруєтся ферментатівні препарати, що містять Мацераза (полігалактуроназі), пектиназу, полівінілпіролідон, сульфат калію, сорбіт (маніт), 2-ГЯ-морфоліно-етансульфонова кислоту. Дана процедура проводитися в ламінарному боксі в условиях суворої стерильності. ОКРЕМІ Клітини такоже могут буті отрімані з суспензій Із використанн мікроманіпулятора, проточного цітофлюоріметрів або путем послідовніх розбавлень. У цьом випадка суспензії готуються різнімі способами:
) 1 - 2 мл суспензії відбірають з супернатанта после осідання ОСНОВНОЇ масі клітін,
) суспензію фільтрують через фільтри з зменшеності діаметром пір. Для послідовніх разкладів Використовують плати для мікротітрувань, что дозволяє мікроскопічно контролюваті клітінній склад при послідовніх розведеннях.Індукція поділок ОКРЕМЕ клітін можлива при застосуванні Дуже багато жівільного середовища, причому про єм середовища винен буті мінімальнім. Однако даже при дотріманні всех ціх умів Відсоток розділіліся клітін залішається очень низька. Більш ефектівні методи «годуючого шару» або «тканини-няньки». Для создания «годуючого шару» беруть суспензію клітін того ж виду рослини. Клітінна суспензія винна знаходітіся в Ранній Стадії ростового циклу. Калусна культура, что служити «ТКАНИНИ-няньку», такоже винна буті в Стадії активного зростання. При досягненні колонією, что виросла з окремої Клітини, розміра 0,5-1 мм, вона может буті перенесена для Подальшого вирощування на агарізоване жівільне середовище безпосередно або на фільтр, поміщеній на поверхню пожівного агару. Використання «годуючого шару», «тканини-няньки» або мінімального ОБСЯГИ середовища, в якові поміщається окрема клітина, пов язане з явіщем, звання «дія фактора кондиціонування». Незважаючі на чісленні СПРОБА візначіті природу Речовини, Які індукують поділ окреної Клітини, и Механізм Дії фактора кондиціонування, данє продуктах залишкових НЕ вірішене. Вивчення механізму взаємодії клітін при розмноженні їх в популяції - Важлива наукова проблема, яка вірішується на Рівні культівування ОКРЕМЕ клітін. [9]
Принципи складання пожівніх середовіщ
Всі живі Клітини потребуються екзогенніх джерелах живлення, що трімаються в пожівніх СЕРЕДОВИЩА. Жівільне середовище Забезпечує жіттєдіяльність, ріст и розвиток біооб'єктів. Перш чем почінаті роботи з культівування різніх тіпів клітін, звітність, точно знаті їх.
Постійнім компонентом пожівної середи є вода, в Якій потребуються всі живі Клітини. Жівільні Речовини утворюють (мінеральнісолі, цукри, амінокислоти, карбонові кислоти, спирту, Альдегіди) або колоїдні (Білки, ліпіді, неорганічні з єднання) розчини. Деякі компоненти пожівніх СЕРЕДОВИЩА, что знаходяться в твердому агрегатному стані, могут або утворюваті придонних Облогах, або рівномірно розподілятіся по всьому об єму у виде суспен...
