а умови повної аглютинації другого ряду.
Реакція аглютинації латексу використовується для індикації вірусного антигену. Патологічний матеріал гомогенізують в 0,01 М фосфатно-сольовому буфері (рН = 7,2) у співвідношенні 1:1, тричі заморожують і розморожують. Вируссодержащую суспензію центрифугують при 3000 об./Хв. 30 хвилин. Надосадову рідину зливають для постановки РАЛ. p> гіперімунні сироватку до вірусу ИББ отримують імунізацією курчат інактивованої олійно-емульсійної вакциною. З сироватки виділяють гамма-глобулінової фракцію осадженням сульфатом амонію. p> Латексний антитільний діагностикум готують, змішуючи суспензію латексу (2%-ва концентрація часток) з рівним об'ємом гамма-глобулінової фракції у відповідному буферному розчині. Суміш інкубують 16-18 годин при 4 В° С, потім центрифугують 30 хвилин при 3000 об./Хв. і тричі промивають осад буферним розчином. Сенсибілізований латекс ресуспендіруют в цьому ж розчині до кінцевої концентрації частинок (0,5 - 2,0%) і додають 0,05% азиду натрію. Готовий діагностикум зберігають у холодильнику при 4 В° С.
Реакцію аглютинації латексу ставлять на предметному склі. На нього наносять дозатором 25 мкл антигену в розведенні від 1:2 до 1:512, додають 25 мкл латексного антитільної диагностикума і змішують, плавно повертаючи. Результати реакції враховують через 2-5-хвилин за трибальною системою: різко позитивна реакція (+ + +) - чітка аглютинація, великі пластівці в прозорої рідини; позитивна (+ +) - аглютинація видно, однак фон повністю не прояснюється; негативна (-) - каламутна гомогенна рідина. Контролем служать суміш латексу з 0,85%-ним розчином натрію хлориду (контроль диагностикума), з позитивним і негативним антигенами (позитивний і негативний контроль). p> Реакція іммунодіффузіі (РІД). Дана методика широко використовується як з метою індикації та ідентифікації вірусу хвороби Гамборо, так і для визначення специфічних антитіл. При постановці РІД використовують набори для діагностики хвороби Гамборо ВНІВІП або ВНИИЗЖ. p> У лабораторії патологічний матеріал зважують, додають еквівалентну кількість 0,85%-ного розчину натрію хлориду або дистильованої води, гомогенізують, проморожують і центрифугують при 3000 об./хв. протягом 10 хвилин. Надосадову рідину зливають і використовують для дослідження в РІД. p> Для постановки реакції використовують 1,25%-ний агар з 8% натрію хлориду і 0,5% фенолу. Чашки Петрі заповнюють за 24-72 години до використання, попередньо розчиняючи агар на пару і заливають по 20 мл в чашки. Шар агару повинен бути не менше 3 мм. p> Для дослідження проб використовують лінійний порядок розташування лунок. Роблять 3 ряди вертикальних лунок діаметром 5 мм, на відстані 5 мм. Агарові пробки видаляють голкою або пінцетом. p> Кожну пробу випробуваної діагностичної сироватки розводять фізіологічним розчином (0,85% розчин натрію хлориду) спочатку 1:2, а потім послідовно дворазовим кроком до 1:256.
Сухі еталонні антигени перед викори...
