і) до тиску 40-60 МПа. Деякі силикагели, використовувані як матриці, руйнуються при тисках 20-30 МПа. Органічні гелі, як правило, можуть працювати при тисках, що не перевищують 5-10 МПа. Виходячи з цього, слід прийняти для набивання колонок тиск 20-60 МПа при використанні сорбенту з сілікагелевой матрицею.
При роботі з новим видом сорбенту або з новою партією слід упакувати спочатку коротку колонку (10-12 см) при відносно невисокому тиску (20-25 МПа). При хорошому результаті можна спробувати упакувати довшу (200-250 мм) колонку при високому тиску (40-60 МПа). Якщо ефективність збільшиться приблизно вдвічі одночасно із збільшенням опору потоку в два рази, значить сорбент міцний, його можна використовувати при таких параметрах набивання. Якщо опір потоку зросте в 2,5-6 разів, це означає, що сорбент неміцний і руйнується, утворюється пил різко збільшує опір колонки, потрібно знижувати тиск при набиванні. Особливу обережність слід проявляти при виборі тиску для набивання силікагелів з широкими порами (більше 10 нм) і з великим обсягом пір, які знаходять все більш широке застосування в ексклюзіонной хроматографії полімерів і в аналізі біологічних об'єктів - білків, поліпептидів і ін
При упаковці колонки можна вважати оптимальним обсяг поданого розчинника, в 4-6 разів перевищує обсяг резервуара для суспензії.
Після того як потрібний обсяг розчинника поданий при упаковці колонки, слід перекрити відповідний кран. Потік розчинника зупиняється тим повільніше, ніж дрібніше зернового сорбенту, довший колонка, більш в'язкий розчинник і більше об'єм резервуару для суспензії. До повної зупинки потоку з колонки, що забирає зазвичай 1-6 хв, ні в якому разі не слід від'єднувати колонку, так як шар сорбенту в колонці може бути розпушений при різкому зниженні тиску. Після зупинки потоку розчинника слід від'єднати колонку від системи набивання, обережно лезом бритви зрізати виступаючий шар сорбенту урівень з кінцем колонки, зняти надлишки сорбенту з трубки і конуса, покласти фільтр на сорбент, акуратно одягнути фітінг, загорнути і затягнути гайку спочатку від руки, а потім з допомогою двох ключів. Потім встановлюють дві заглушки, що запобігають висихання сорбенту, після чого колонка вважається готовою до зберігання або тестуванню.
При переході до новій системі розчинників слід пам'ятати, що вона повинна змішуватися з попередньою системою, не викликаючи при цьому поділу на дві незмішувані фази. Якщо це може відбутися (наприклад, при переході від системи метанол - вода до системи гексан-ізопропанол або від системи фосфатний буферний розчин до системі метанол - вода або ацетонітрил-вода), треба промити колонку проміжним розчинником, повністю смешивающимся з обома системами розчинників. У Інакше виділилася гетерофази (в наведених прикладах - це вода і сіль) викличе безліч проблем: нестабільність характеристик утримування; дрейф і нестабільність нульової лінії детектора; підвищення тиску на вході в к...
