лівок є максимальне наближення до умов живих систем. Постійне надходження поживних речовин і видалення продуктів життєдіяльності мікроорганізмів дозволяє значно інтенсифікувати процес формування біоплівки. Умови, що забезпечують життєдіяльність мікроорганізмів в біоплівки, отриманої такими методами, стандартизовані, а вплив сторонніх чинників мінімізовано.
У модифікаціях методу Робінсона і в проточному методі можливе вивчення процесу утворення або придушення біоплівок в реальному часі з використанням світлової мікроскопії. До недоліків даної групи методів можна віднести їх обмежене використання в зв'язку з великими обсягами споживання поживних середовищ, складною конструкцією обладнання, утрудненням стерилізації внутрішніх поверхонь апаратів, низькою продуктивністю методів, високою вартістю експлуатації.
Друга група методів заснована на створенні статичних умов культивування мікроорганізмів. [9]
Найбільш часто використовуваної технікою, серед даної групи, є метод із застосуванням 96-лункових пластикових планшетів в різних модифікаціях. Метод заснований на здатності бактерій формувати біоплівки на поливинилхлоридні Пластики (ПВХ) Суть методу можна охарактеризувати наступним чином: суспензія бактерій вноситься в лунки планшета, після інкубації в оптимальних умовах планктонна фаза популяції бактерій видаляється разом з живильним середовищем, що утворилися біоплівки забарвлюють кристал Віолет і проводять кількісний облік пов'язаного барвника в спектрофотометрі, що дозволяє проводити кількісні порівняння здатності освіти біоплівки різними штамами [10]. Цей метод досі не втратив своєї значимості, проте науковий інтерес вітчизняних дослідників до нього останнім часом значно знизився, а практичне значення так і не отримало належної оцінки в нашій країні. У першу чергу, це пов'язано з тим, що для цього методу не розроблені стандарти, що дозволяють уніфікувати його в різних лабораторіях.
Вже в ранніх роботах була відзначена різна адгезивная здатність одних і тих же штамів мікроорганізмів до різних поверхонь. Даний факт пов'язаний з тим, що всі мікроорганізми мають здатність прикріплятися до органічних і неорганічних поверхням, а адгезія є пусковим механізмом у розвитку інфекційного процесу. Адгезію поділяють на неспецифічну і специфічну. Перша обумовлено физикохимическими процесами взаємодії бактерій з поверхнею: електростатичні і гідрофобні взаємодії, броунівський рух. Неспецифічне прикріплення здійснюється до біотичних і абіотичних об'єктам і більшою мірою оборотно. Специфічне прикріплення відбувається після молекулярних взаємодій між молекулами-адгезін і рецепторами клітин господаря. Важливу роль в адгезії мікроорганізмів до різних поверхонь відіграють також електричні заряди. Бактеріальна поверхню заряджена негативно, причому у грампозитивнихмікроорганізмів це обумовлено наявністю в клітинній стінці тейхоевих і ліпотейхоевая кислот, а у грамнегативних - присутністю кислих липополисахаридов і білків.
Таким чином, використання планшетів навіть одного виробника може призводити до отримання значно розрізняються результатів, що обумовлена ??їх физико-хімічними особливостями. Так, наприклад, деякі виробники випускають планшети зі специфічним зв'язуванням вуглеводів, амінів, ДНК, сульфгідрильних груп; зі спеціальною обробкою поверхні для клітинної адгезії, в тому числі і покриті полілізіном для білкової кристалізації. Необхідно враховувати той факт, що до поверхні лунок планшетів мікроорганізми прикріплюються за рахунок неспецифічних факторів.
Крім особливостей поверхні планшета, на формування біоплівок в даній групі методів впливають склад поживних середовищ (мікронутріентной і електролітний) і ступінь аерації.
Однією з модифікацій планшетного методу дослідження формування біоплівок є ALI-метод (air-liquid interface). Його суть полягає в культивуванні мікроорганізмів в планшеті, який знаходиться під кутом 30 ° - 50 ° таким чином, щоб меніск рідкого ПС стикався з серединою дна лунки. Середина лунки є найбільш оптично чистої зоною планшета. У місці зіткнення рідкого ПС з цією зоною формуються максимально сприятливі умови для формування біоплівки.
Цей метод дозволяє візуалізувати біоплівки без необхідності використання барвників за допомогою фазово-контрастної мікроскопії, а моніторинг можна проводити в режимі реального часу. Його недоліком є ??можливе зменшення об'єму поживного середовища в лунці і, як наслідок, висихання місця контакту адгезірованних мікроорганізмів із середовищем. З цієї причини, виникає необхідність постійного внесення живильного середовища в лунки, або зменшення часу інкубації.
У зв'язку із зростаючим інтересом стоматологів до проблеми біоплівок був розроблений метод їх формування на гідроксіапатітовие дисках. Матеріал дисків був обраний чере...
