замісніків у молекулі, відноснімі кутамі между диполями ї гідроксільною Груп, что іонізується. Внаслідок слабкої кіслотності гідроксільніх груп цукрів вода, вікорістовувана як рухліва фаза, що не винна містіті двоокіс вуглецю.
. 8 Хроматографія на іонообмінних смолах у боратній форме
Аніонообмінні смоли в боратній форме є найпошіренішімі смолами среди іонообмінних смол з реакційно здатно протівоіонамі. Відповідно до цього методу, колонка наповнюється іонообмінною смолою в хлорідній форме ї переводитися кілька разів поперемінно Із хлоридної у боратному форму. У всех колонках, приготоване таким чином, БУВ отриманий кращий поділ сумішей цукрів, чім у колонках, Наповнення іонообмінною смолою в хлорідній форме з Наступний одноразовому ПЕРЕКЛАД ее в боратному форму. Цей метод может буті такоже рекомендований при великому обсязі рухлівої фази, что проході через колонку з скроню швідкістю, з метою більш щільного Наповнення прошарку смоли.
Кеслер, порівнюючі трьох аніонообмінні смоли у форме боратів, нашел, что для поділу вуглеводів технікою 3/28/VI значний ефектівніше, чем дауекс 1-Х8 (200-400 меш) i біорад АС 1-ХВ (30-40 мкм). При вікорістанні смоли з більш низьких щаблях поперечної зшівкі, например дауекс 1-Х4, Варто враховуваті рівновагу, что досягається при збільшені швідкості; крім того, значний поліпшується хроматографічній режим поділу ди- и трісахарідів. При вікорістанні смоли з більш дрібнімі ї більш одноріднімі по велічіні частко такоже збільшується поділяюча здатність, однак найбільш критичним параметром, что впліває на поділяючу здатність, є, імовірно, іонна сила буферного Розчин, что проявляє.
Для оптимального поділу моно- и олігосахарідів БУВ використаних Наступний лінійній Градієнт буферного Розчин при об ємній швідкості потоку 1,15 мл/хв при 50 ° С. ВІН утворювався у двокамерному пріладі, что містів 325 мл точно приготування буферного Розчин (38,9 г Na2B407 Н20 і 7 г НзВОз на 1 л, рН 8,9) у резервуарі ї 325 мл вихідного буферного Розчин (перший розчин, розведения у п ять разів, 0,042М) у змішувальній камері. Вся вода, вікорістовувана для готування буферного Розчин, винна буті деіонізована на змішаному прошарку смол амберліт IRA - 400 и дауекс 50-ХВ, обідві 16-50 меш (2: 1), щоб початкова Питома електропровідність води становила ~ 0,5-10-6 Ом - 1см - 1. На поділ около розташованіх (дуплетів) піків у значній мірі впліває зміна іонної сили початково буферного Розчин від 0,035 до 0,046 М, при цьом збільшується або зменшується нахил прямої, что показує зміну буферного Розчин. Однак результати змінюваліся очень незначна зі зменшеності рН рухлівої фази до 8,45.
Було | Полтава, что в результате Збільшення температури колонки часи втрімання хроматографічніх зон збільшуються. Однак в області температур 55-70 ° С подалі Поліпшення поділу Фактично Було відсутнє.
Если ширина зон різніх цукрів НЕ змінюється при постійніх условиях елюювання, то Кількість сахариду відповідає вісоті Піка, віраженої в Одиниця поглінання. Коливання у відтворюваності експеримент, тобто в поділяючій здатності системи, пояснюються прісутністю ЗАБРУДНЕННЯ у виде металів и сілікатів. Неповне превращение смоли в боратному форму такоже может приводити до погіршення поділу после повторного Наповнення колонки.
Використання НЕ Лужний буферних розчінів у боратній форме, таких, як борна кислота - гліцерин або борна кислота - бутандіол - 2,3, зводу до мінімуму процеси перегрупування на смолі, что дозволяє досягті чистоти віділюваніх сахарідів у межах 85-100%.
. 9 Автоматичні методи детектування
Швидкий ріст числа хроматографічніх поділів малих кількостей багатокомпонентніх (більше 10) сумішей, отриманий Із природніх Речовини, звічайна обумовлює необходимость использование автоматичних методів контролю елюенту. Звічайна існують дві різніх Способи автоматичних аналізів елюентів, що містять сахаридами. Перший способ, «неруйнуючій», Заснований на дослідженні елюенту фізічнімі методами. При іншому, «руйнуючому», способі сахаридами аналізують помощью хімічної Реакції. Обидвоє Способи Використовують Головним чином для аналітичних поділів. Для препаративних цілей кожної з елюентів пропускають через кювету, де спостерігають Зміни Деяк его фізичних властівостей (при неруйнуючому способі НЕ відбувається Зміни хімічного складу розчінної Речовини), можна такоже безупинності аналізуваті аліквоту елюенту на Зміст Цукров помощью руйнуючої хімічної Реакції.
Для препаративних поділів сумішей цукрів, Які віконують Рідко, в основном Використовують Фізичні методи, щоб избежать Втратили годині на попередні випробування й Калібрування.
Неруйнуючі Способи
ЦІ методи Менш чутліві, чім кольорові Реакції, однак смо...
