Реагенти готові до застосування. Реагенти, навіть після розтину флаконів, можуть зберігатися при 2-8 С до зазначеного терміну придатності. Буферний розчин необхідно зберігати в захищеному від світла місці. Слід уникати забруднення реагентів!
Метод роботи з робочим реагентом. Для приготування робочого реагенту слід: Обережно - змішати реагент 1 (Буферний розчин) і 2 (Субстрат) у співвідношенні 4: 1 Робочий реагент можна зберігати протягом 3 тижнів при 2-80С або 3 дні - при 15-25С. Робочий реагент слід зберігати в захищеному від світла місці.
Досліджуваний матеріал:
Сироватка, гепарін- або ЕДТА-плазма.
Не застосовувати гемолізовані проби!
Падіння активності протягом 3 днів
при 2-8С - 8%, при 15-25 ° C - 2%.
Схема проведення аналізу:
Довжина хвилі: Hg 334 їм, 340 нм, Hg 365 нм
Довжина оптичного шляху: 1 см
Температура: 25С, 30С або 37С
Вимірювання: щодо повітря (зменшення поглинання). Реагенти та кювети прогріти до необхідної температури. Температуру протягом аналізу підтримувати постійною (± О.5С).
Схема піпетування *
Таблиця 5 Метод роботи з індивідуальними реагентами
У кювети піпетіровать25С, 30С37СПроба 20мкл10мклБуферний раствор1000мкл1000мклПеремешать, інкубувати 1-5 хвилин при необхідній температуреСубстрат250мкл250мклПеремешать, через 1мінуту виміряти поглинання і одночасно включити секундомір. Точно через 1,2,3 хв повторити вимірювання.
Таблиця 6 Метод роботи з робочим реагентом
У кювети піпетіровать25С, 30С37СПроба20мкл10мклРабочій раствор1000мкл1000мклПеремешать, через 1мінуту виміряти поглинання і одночасно включити секундомір. Точно через 1,2,3 хв повторити вимірювання. При використанні мікрокювет обсяги можна зменшити вдвічі
Розрахунок
Розрахувати середню величину зміни поглинання в хвилину (* А/хв) і її підставити у формулу:
Активність ЛДГ (Од/л)=* А/МНН Х F Застосовувати наступні фактори:
Таблиця 7 Метод роботи з індивідуальними реагентами:
Значення фактора FHg334нм340нмHg 365нмF (25С, 30С) 102751008018675F (37С) 20390200037060
Таблиця 8 Метод роботи з робочим реагентом:
Значення фактора FHg334нм340нмHg 365нмF (25С, 30С) 8250809515000F (37С) 163451603029705
Фактор перерахунку результатів, виражених у традиційній системі одиниць (Од/л), в Міжнародну систему одиниць (кат/л):
Од/л=16,67х10 - 3 мккат/л, 1 мккат/л=60 Од /.
Експлуатаційна характеристика
Лінійність: Якщо зміна адсорбції в хвилину становить * A/min=0,150 при Hg 334 нм, 340 нм або 0,070 при Hg 365 нм, необхідно 100 мкл проби змішати з 900 мкл фіз. розчину (0,9% NaCl) і повторити визначення. Отриманий результат помножити на 10.
Таблиця 9 Діапазон референтних величин
Температура25С,Ед/л30С,Ед/л37С,Ед/лВзрослые120-140160-320225-450Дети (до року) До 500 Визначення аланінамінотрансферази
Кінетичний метод.
Кат № ~ 001.017.01 Ферментний реагент 1 * 80мл
Субстратний розчин 1 * 20млт № ~ 001.017.10 Ферментний реагент 1 * 800мл
Субстратний розчин 2 * 100млт № 001.017.11 Ферментний реагент 4 * 80мл
Субстратний розчин 2 * 40мл
Принцип методу
Модифікований, оптимізований кінетичний метод відповідно до рекомендацій Міжнародної Федерації Клінічної Хімії (IFCC), без активації пиридоксальфосфатом:
АЛАТ
- 0ксоглутарат + L-Аланін ~ L-Глутамат + Піруват
ЛДГ
Піруват + НАДН + Н + ---- L -Лактат + НАД +
Склад набору
. Ферментний реагент:
ТРІС-буфер (рН 7,5) 150 ммоль/л -Аланіі 750 ммоль/л
ЛДГ? 1,2 кед/л
. Субстратний розчин:
- 0ксоглугарат 90 ммоль/л
НАДН 0,9 ммоль/л
Підготовка і стабільність реагентів
При роботі з індивідуальними реагентами: Реагенти готові до використання і стійкі, навіть після розтину флаконів, до зазначеного терміну придатності при зберіганні при - 2 - 8 С у захищеному від світла місці. Слід уникати забруднення реагенті...
