r/>
Воно необхідно для виділення та ідентифікації збудника, для визначення латентного дерматофітозів, носійства дерма-Тофіта здоровими особами, виявлення дерматофітів у навколишньому середовищі та визначення чутливості культури до хіміопрепаратів
3.1 Отримання чистої культури
Досліджуваний матеріал слід максимально подрібнити і засівати в мінімальних кількостях на скошений агар в пробірках в 2-4 точки на відстані 1-2 см. Матеріалом однієї проби засівають не менше 2-3 пробірок (волосся) і 4-5 пробірок (шкірні та нігтьові лусочки) на дві різні поживні середовища. Для первинної ізоляції дерматофітів переважно використовувати стандартну агаршованную середу Сабуро (SDA); 2 або 4% глюкози (глюкоза 20 або 40 г, пептони 10 г, агар 20 г, дистильована вода до 1000 мл, рН 6,8-7,0), сусло-агар (пивне сусло, розбавлене дистильованою водою до 7% вуглеводів по Баллінг, агар 20 г) або середовище Сабуро з антибіотиками: антибактеріальні антибіотики (пеніцилін: 50 мкг/мл + стрептоміцин 50-100 мкг/мл або левоміцетин 50 мкг/мл, або біоміцин 200 од/мл, гентаміцин) і антіплесневой антибіотик актідіон (циклогексимид) 0,1-0,4 мг/мл. Приготування селективних середовищ з антибіотиками - 200 000 од кристалічного пеніциліну розчиняють у 10 мл стерильної води, 1 мл цього розчину + 9 мл води дають концентрацію 2000 мкг/мл. Додавання 2,5 мл цього розведення до 100 мл розтопленій та охолодженої до 50 В° середовища дає концентрацію пеніциліну 50 мкг/мл. Аналогічно виробляють додавання в середовище стрептоміцину (1 г стрептоміцину = 1 млн.ед). Біоміцин додають розчиненням 1 таблетки (100000 од) в 500 мл остигає середовища. Левоміцетин попередньо розчиняють у 10 мл 70 В° етилового спирту і додають у середу до концентрації 50 мкг/мл. Актідіон (антибіотик з Streptomyces griseus) - білий кристалічний порошок, термостабільний, добре розчинний в ацетоні. У 1 мл ацетону розчиняють 10-50 мг актідіона, доводять до 2 мл дистильованою водою і додають до 100 мл остигає середовища. Актідіон не впливає на зростання дерматофітів і пригнічує багато цвілеві гриби, а також види Candida і Cryptococcus. Тому при підозрі на етіологічним роль цих грибів посіви слід проводити також і на середовища без актідіона. p> Посіви інкубують в термостаті при 25-30-37 В° відповідно (частіше 30 В°) і досліджують тижні до 4 тижнів. При підозрі на Т. verrucosum половину засіяних пробірок слід інкубувати при 37 В°, так як гриб швидше зростає при цій температурі. Перші ознаки зростання дерматофітів відзначають з 4 по 12 день інкубації в точках посіву по краях внесеного матеріалу. За відсутності зростання протягом 30 днів результати культивування вважають негативними. У оптимальних умовах первинні культури багатьох дерматофітів можна ідентифікувати на 7-10 день після посіву, але у випадку фавіформних грибів іноді тільки на 20-30 день. Первинні культури ростуть порівняно повільно і при використанні середовищ без антибіотиків можуть бути придушені більш швидко зростаючими бактеріями і пліснявими грибами. На відміну від останніх, колонії дерматофітів ніколи не бувають чорними, блакитними або зеленими. Важливо дотримуватися асептику при взятті та зберіганні матеріалу, а також дослідити його в найкоротший термін. При появі росту бажано провести відсів з краю первинної культури на свіжу середовище для отримання чистої культури. Перед інкубацією засіяні і надписані чашки Петрі слід загорнути в поліетилен або в папір для запобігання швидкого висихання і вторинного повітряного забруднення.
3.2 Ідентифікація чистої культури
3.2.1 Характеристика колоній
При описі колоній слід відзначати такі ознаки як час появи і швидкість зростання колонії, її розміри, колір поверхні і зворотного боку, характер поверхні і її рельєф, форму і край колонії, її консистенцію і наявність вростання в субстрат. Характеризуючи колонію, вказують на її відмінності від типових штамів, що важливо для оцінки поліморфізму даного виду гриба, а також для виявлення атипових штамів і нових, рідкісних в Росії видів.
3.2.2 Мікроскопічне дослідження культур
При малому збільшенні і сильному освітленні можна досліджувати край колонії через скло пробірки, так як нитки міцелію переміщаються на скло. Наявність і розташування характерних морфологічних елементів (конідії, спіралі) у поєднанні з культуральними ознаками в раді випадків дозволяють попередньо. тельно визначити вид без приготування мікропрепарату або мікрокультури. При такому дослідженні пробірку можна фіксувати рукою або використовувати дерев'яну підставку з вирізом.
Для приготування мікропрепарату фрагмент культури розщеплюють мікологічної лопаткою і препаровальной голкою на предметному склі в краплі рідини (вода, розчин Люголя, лак-тофенол, етанол + вода 1:1, етанол + гліцерин + вода 2:4:4) і накривають покривним склом. Культуру для дослідження беруть з центральної та периферичної зони колонії. Мікроскопіровать слід спочатку під...
