труктури порінов як в зовнішній мембрані, так і в ізольованому стані крім гідрофобних взаємодій істотну роль грають водневі та іонні зв'язку. Саме цим обусловленна надзвичайна стійкість цих білків до протеазам, підвищеній температурі та іншим денатуруючих факторам. Основною структурною особливістю порінов є відсутність в їх поліпептидного ланцюга досить протяжної послідовності, що складається з гідрофобних амінокислотних залишків, подібної до тієї, що «прошиває» мембранний бішар у разі альфа-спіраль мембранних білків.
Роль порінов по здійсненню контролю за проникністю зовнішньої мембрани бактерій пов'язана з конформационной пластичністю цих білків, т. е. здатністю утворювати безліч конформаційних станів (інтермедіаторов). Ці властивості порінов використовуються клітиною для адаптації бактерій до зміни умов навколишнього середовища. Як правило, в клітці існують різні популяції порінов з високим ступенем гомології на рівні первинної структури, але з різним діаметром пір. Клітка регулює проникність зовнішньої мембрани допомогою експресії порінов з меншим або більшим діаметром пір у відповідь на зміну умов і вплив різних факторів зовнішнього середовища.
На сучасному етапі розвитку імунології та вакцинопрофілактики основним критерієм при виборі антигену для вакцинації стало забезпечення можливості отримання водоспеціфіческого імунітету, а також ефективного захисту від аерогенним інфікування. Препарати, створені на основі білків зовнішньої мембрани бактерій, і насамперед порінов, можуть захищати від інфекцій, спричинених усіма типами даного виду мікроорганізму (Портнягина О.Ю. і соавт.2004).
пороутворюючих білок Yersinia pseudotuberculosis володіє рядом імунологічних особливостей, що дозволяють використовувати його в вакцинних препаратах. Вибір термостабільної суб'едінічной форми порінов в якості антигену обумовлений його низькою гемолітичною активністю, більш вираженими імунними властивостями в порівнянні з його нативної тримерной формою. Однак, імуногенність цього білка, в цілому, не висока, що робить необхідним застосування для імунізації цим антигеном підсилювача імуногенезу.
3. МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ
У роботі використовували безпородних білих мишей лінії СВА масою 20-25 грам.
фосфотіділхолін (ФГ) був отриманий у відповідності з методикою (Singleton et al., 1965).
Холестерин (Хол), сапонін з Quillaja saponaria (QuillA) використовували виробництва Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, U.S.A.).
Моногалактозілдіацілгліцерол (МГДГ), дігалактозілдігліцерол (ДГДГ), сульфохіновазіндігліцерол (СХДГ) виділяли з морських водоростей Laminaria japonica, Ulva finistrata відповідно до методики, описаної (Sanina et al., 2003).
Кукумаріозід А2-2 (КД) - тритерпеновий глікозид з Cucmaria japonica, що володіє властивостями сапоніну, був наданий співробітниками лабораторії хімії морських природних сполук ТІБОХ (Завідувач лабораторії Стонік В.А.).
Імуностимулюючий препарат «Кукумаріазід» був розроблений на основі комплексів, які з кукумаріозіда А - 2 (рис.4) з Cucumaria japonica і холестерину. Дослідження иммуномодулирующей активності серії кукумаріозідов з голотурії Cucumaria japonica показало, що в наднизьких дозах моносульфатірованние кукумаріозіди впливають як на клітинну, так на гуморальну ланки імунітету. Тритерпенові глікозиди голотурій здатні значно стимулювати лізосомальну активність перитонеальних мишачих макрофагів. При цьому сума кукумаріозідов цієї голотурії не володіє мутагенною активністю і дозволена до практичного застосування у ветеринарії. Але їх застосування в складі вакцин до теперішнього часу не вивчено.
Рис. 4 Кукумаріозід А2-2
Дані гліколіпіди володіють різною біологічною активністю, що привертає увагу дієтологів, фармацевтів, біотехнологів до цієї филогенетически різноманітної групі рослин. Можливо, біологічна активність морських макрофітів пов'язана з високим вмістом глікогліцероліпідов, але їх медико-біологічні властивості досі погано вивчені, хоча відомо, що моногалактозілдіацілгліцерол зелених водоростей проявляє протипухлинну активність. Сульфохіновозілдіацілгліцерол з морських водоростей інгібує ДНК-полімеразу та ВІЛ-зворотну транскриптазу. Біологічну активність морських глікогліцероліпідов пов'язують як зі структурою вуглеводної складової, так і з присутністю великої кількості полінасичених жирних кислот.
Ліпід-сапонінових комплекси отримували наступним чином: розчини холестерину і МГДГ в хлороформі при ваговому співвідношенні холестерину і МГДГ 2: 6 упаривали під вакуумом до видалення хлороформу і додавали 3 вагові частини 0,4% водного розчину QuillA ( або КД). Отриману ліпідну плівку суспендованих в 1 мл фосфатно-сольового буфера (ФСБ) (pH 7,2), ...
