гр. КОН і 6 гр. Н 3 ВО 3 на 200 мл. дісцілірованной води.
9) Заливаємо 100 мл розчину до ксілеме і відстоюємо 1 годину, потім Центріфугіруем і виливаємо надосадову рідину.
10) Промиваємо водою: заливаємо дісцілірованной воду в центрифужні стаканчики ретельно перемішуємо і Центріфугіруем на 4000 об/хв. промиваємо доти поки рН середовища не буде нейтральним.
2.3 Розчинення целюлози
Отримання розчину хлориду літію в N , N - диметилацетаміді
1) N, N-диметилацетамід (ДМА) сушили над молекулярними ситами 4А. p> 2) У колбу присипали 8 гр. хлориду літію і нагрівали в термостаті до 180 0 протягом 4-5 годин, потім охолоджували і доливали 100 мл. висушеного над молекулярним ситом ДМА.
3) Колбу закривали скляною пробкою і розчин перемішували на шейкері до розчинення хлориду літію (залишали на ніч).
Виділення міцно пов'язаних полісахаридів з розчиненою целюлози клітинної стінки ксилеми льону
1) 1 гр. В«ЦелюлозиВ» суспендованих в 10 мл. води 40-60 хв.
2) Відокремлювали на воронці Шота зі вставленим нейлоновим фільтром.
3) Осад промивали на фільтрі ацетоном.
4) Витримували в ацетоні (10 мл., 60 хв.)
5) Осад промивали на фільтрі ДМА
6) Витримували в ДМА (10 мл., 40-60 хв.)
7) Залишали на ніч у свіжій порції ДМА
8) На воронці шота відокремлювали В«целюлозуВ»
9) Суспендованих її в 100 мл розчину хлориду літію в N, N - диметилацетаміді.
10) Колбу закривали скляною пробкою і перемішували до розчинення целюлози на шейкері (1-2 дні). p> 11) Розчин целюлози по краплях додавали до 100 мл. дісцілірованной води при перемішування на магнітній мішалці. Розчин залишали на ніч. p> 12) відокремлюють випала целюлозу на воронці Шота з нейлоновим фільтром і промивали її два - три рази дісцілірованной водою (по 50 мл.) Отримали Фільтрат 1
13) Фільтрат 1 Заливали в діалезний мішок 12 - 14 тисяч Дальтон. p> 14) Діалезний мішок клали в 3-х літрову банку з дісцілірованной водою і ставили на магнітну мішалку, воду в банку міняли 4 рази.
15) На роторному випарнику концентрували розчин.
16) Хроматографіруем концентрований розчин. Готуємо 40 пробірок, моєму їх хромка і сушимо в сушильній шафі при 120 0 С.
17) На хроматографі задаємо програму (по краплях, 40 пробірок, в одну пробірку 40 крапель ≈ 1,8 мл.)
18) У епіндорф вливаємо концентрований розчин і Центріфугіруем 5 хв. при 6 000 об/хв. p> 19) Хроматографування на Sepharose CL-4B елюент 0,02% NaN 3 і АсNa 10 mM pH 5,5, поділ за молекулярним масам.
20) Визначаємо кількість цукрів методом Дюбуа (фенольним методом). 200 мкл зразка +200 мкл 5% розчину фенолу, поміщаємо пробірки в холодну воду і додаємо 1 мл. концентрованої сірчаної кислоти. Кип'ятимо на водяній бані 10 хвилин і охолоджуємо...
