опів сорбують на твердій фазі. Випробувану пробу додають до твердої фазі, інкубують, відмивають. Після відмивання вносять кон'югат антитіл до другого Епітопи з ферментом (Horse Radish Peroxidase). Ферментативна активність, що залишається на твердій фазі, прямо пропорційна змісту антигену в пробі.
Естрадіол і прогестерон визначали методом конкурентного РІА.
Принцип методу конкурентного РІА полягає в наступному. В аналітичній пробірці, що містить компоненти набору і зразок сироватки крові, під час інкубації встановлюється рівновага між [125I] -гормоном (естрадіолом або прогестероном) і ендогенним гормоном аналізованого зразка сироватки крові з антитілами, іммобілізованими на стінках пробірки. Кількість зв'язаного антитілами [125I] -гормона знаходиться в зворотній залежності від концентрації гормону в аналізованому зразку. Поділ вільного та зв'язаного антитілами гормону здійснюють видаленням інкубаційного середовища з пробірок за допомогою водоструминного насоса.
2.2 Процедура визначення естрадіолу і прогестерону
Аналітичні пробірки помістити в штатив і кожну пару пробірок маркувати позначенням тієї величини, для вимірювання якої вони призначені: Т - для вимірювання загальної активності міченого антигену в пробірці; В0 - В5 - для побудови калібрувальної кривої; ВКС - для пробірок з КС; Вx - для досліджуваних зразків сироватки крові пацієнтів.
Відібрати з кожного флакона з калібрувальними пробами по 0,05 мл сироватки і внести в пробірки В0 - В5. З флакона з КС відібрати по 0,05 мл в пробірки ВКС. У пробірки Вх внести по 0,05 мл досліджуваних зразків сироватки крові пацієнтів.
У всі пробірки внести по 0,5 мл розчину міченого антигену.
Інкубувати усі пробірки при температурі (20-25) ° Св протягом 1 год при постійному струшуванні (не менше 300 струшувань в хвилину).
З усіх пробірок, крім Т, повністю видалити вміст за допомогою водоструминного насоса.
Всі пробірки помістити вгамма-лічильник і виміряти зв'язану і загальну активність міченого антигену в кожній пробірці протягом 1 хв.
Визначення хоріонічного гонадотропіну людини (ХГЛ) проводили методом РІА типу «сендвіч».
2.3 Принцип методу «Сендвіч»
У наборі використовується два види мишачих моноклональних антитіл до різних епітопів? - субодиниці ХГЛ, що дозволяє визначати загальний ХГЧ, тобто його интактную молекулу і (? - субодиницю. Досліджувані зразки, контрольні та калібрувальні проби інкубують в пробірках, покритих одним видом моноклональних антитіл спільно з розчином інших антитіл, мічених 125I. Після закінчення, інкубації видаляють рідкий вміст, промивають пробірки і вимірюють пов'язану активність 125 I. Концентрацію загального ХГЛ, прямо пропорційну пов'язаної активності, визначають методом інтерполяції за калібрувальної кривої.
2.4 Процедура визначення ХГЧ
У покриті антитілами пробірки послідовно внести:
а) 50 мкл калібрувальних, контрольних і аналізованих проб відповідно до маркування;
б) 200 мкл мічених антитіл;
Перемішати.
У дві додаткові пробірки внести по 200 мкл мічених антитіл для визначення загальної активності 125I (Т).
Інкубувати 1:00 при (18-25) ° С і постійному струшуванні.
Ретельно видалити вміст пробірок (крім проб Т).
Промити пробірки 2 мл промивного розчину.
Виміряти пов'язану (В) і загальну (Т) активність I протягом 1 хв на гамма-лічильнику.
Розрахунки та графічні побудови проводяться за допомогою спеціальних програм на ПК. Результати (визначення вмісту гормону) розраховують методом інтерполяції за калібрувальної кривої, отриманої одночасно з аналізом невідомих проб.
3. ГОРМОНАЛЬНІ АСПЕКТИ РЕГУЛЮВАННЯ НОРМАЛЬНІЙ ВАГІТНОСТІ У ЛЮДИНИ (РЕЗУЛЬТАТИ ТА ЇХ ОБГОВОРЕННЯ)
Гормональний аспект фізіологічній вагітності незважаючи на багаторічні дослідження, що збагатили науку важливими фактами, не знайшов ще досить різнобічного і повного висвітлення в літературі. Це природно, оскільки сама проблема воістину невичерпна. Нові експериментальні та теоретичні дані, нова клінічна інформація, нові відомості, здобуті в галузі ендокринології вагітності, біохімічної динаміки метаболічних процесів та їх гормональної регуляції при нормальному і патологічному гестаційному процесі - все це вносить відповідні корективи в наші уявлення про гормональному фоні вагітності, одночасно висуваючи перспективні напрямки пробл...
