трапить рівну кількість стороннього матеріалу. Подібного легко уникнути, якщо міняти фонові пробірки раз на місяць-півтора, в цьому випадку, як правило, не встигає з'явитися досить велика різниця між вже готовими фоновими і ампліфікаціонних пробірками.
Найбільш часта помилка при дослідженні методом ПЛР з де
текціей результатів у режимі реального часу пов'язана з приладом, який при великих коливаннях флуоресценції може зафіксувати хибнопозитивні результати. p> У зв'язку з цим необхідно проводити аналіз індивідуальної кривої. Порогова лінія повинна перетинати індивідуальну криву і області почала експоненціального зростання, і це не один з безлічі піків коливання флуоресценції. Також прилад може видати ложноотріцател'ний результат у разі, якщо на перших циклах ПЛР з якихось причин відбулося істотне зменшення флуоресценції. Цю помилку можна виявити при аналізі вихідних кривих флуоресценції. Якщо зразок позитивний, то на вихідної кривої буде видно чіткий експоненціальне зростання. Для більшої достовірності можна порівняти таку сумнівну криву з кривою завідомо позитивною. Всі позитивні криві мають подібний кут нахилу, і рівень флуоресценції при виході на плато зауваж "але відрізняється від коливань і негативних зразках.
3.Ошібкі постаналітіческой етапу ПЛР-діагностики
Помилки на завершальному, постаналітіческой етапі пов'язані з невірною інтерпретацією лікарем результатів ПЛР-аналізу внаслідок помилкових уявлень про інфекційне агента або про можливості методу.
Наприклад, контрольне дослідження на хламідіоз через 1 тиждень після закінчення курсу антибіотиків дасть позитивний результат. Лікар зробить висновок про неефективність проведеної терапії. Однак остаточний висновок можна зробити не раніше ніж через 4-6 тижнів, після того, як зміниться епітеліальний шар, в якому паразитує даний мікроорганізм. Більш рання діагностика може показати невірний результат, оскільки в клітинах епітелію ще зберігаються загиблі мікроорганізми. Важливо враховувати специфічність використовуваних тест-систем. Так, наприклад, пацієнт з передбачуваним діагнозом "Респіраторний хламідіоз" прямує на дослідження. При постановці ПЛР використовується видоспецифическая тест-система для виявлення ДНК С. Trachomatis - результат дослідження негативний. Однак лікар не повинен знімати передбачуваний діагноз, оскільки інфекція може бути викликана іншими видами хламідій, наприклад С. рneumoniа, С. ресоrum, С. psitaci, що не диагносцируются даної тест-системою. Тобто при призначенні ПЛР-дослідження лікар повинен дуже чітко уявляти кордону специфічності застосовуваних тест-систем.
Разом з тим розбіжність результатів різних методів дослідження не говорить про помилку. Найчастіше ПЛР-дослідження дає позитивний результат, в той час як ІФА - негативний. Розбіжність результатів досліджень може пояснюватися, наприклад, періодом "серологічного вікна ".
У разі зворотних результатів дослідже...
