ти повинні бути спочатку екстрагованих полярним органічним розчинником, наприклад, метилен-хлоридом або етилацетат.
Пізніші методи використовують мас-спектрометрії, але часто вимагають дейтерированного внутрішніх стандартів або використання стомлюючої дифференцирующей екстракції і подвійний деріватізаціонной процедури отримання тріметілсілільних похідних, що займає відносно багато часу при аналізі великого числа проб [73]. Цей метод має високу специфічність і дозволяє аналізувати похідні гідразину разом з INH і AcINH, що використовується для фармакокінетичних досліджень. Також є статті в яких використовується ГХ-МС для визначення пиразинамида і його похідних, межа виявлення 10 мкг / л для PZA.
Флуоріметріческійметод, розроблений Міселі і Олсоном [74], дозволяє визначати як сам INH, так і його ацетильную похідне після гідролізу, на рівні 0,02 мг / л, але необхідна вкрай складна і тривала пробопідготовка.
Підсумовуючи все вищесказане, можна зробити висновок, що основними недоліками перерахованих вище методів є:
складність і тривалість пробопідготовки;
висока вартість аналізу.
1.3.3 Капілярний електрофорез
Зазвичай вважається, що дата виникнення капілярного електрофорезу (КЕ) - 1981-й, коли Джоргенсон і Лукас описали ефективне розділення пептидів, використовуючи зонний електрофорез в скляному капілярі діаметром 75 мкм. Зараз приблизно 150 ліків різних класів вимірюються цим методом в біорідинах для токсикологічних, фармакокінетичних і фармакогенетичних цілей [75]. Метод має ряд безперечних достоїнств: малий обсяг аналізованої проби і використовуваних дорогих розчинників, висока розділяє здатність, швидкість, відносно низька вартість аналізу. Тому в майбутньому цей метод має хороші перспективи для використання в широкій клінічній практиці, але на даний момент внаслідок таких недоліків, як відносно низька чутливість і відтворюваність і недостатня ступінь автоматизації, метод КЕ поки не знаходить широкого застосування для рутинного аналізу [76]. Оганесяном із співробітниками був розроблений і охарактеризований метод визначення рифампіцину в плазмі крові за допомогою системи капілярного електрофорезу фірми Хьюлетт-Паккард [77]. Межа виявлення - 1 мкг / мл. Метод був з успіхом використаний для вивчення біоеквівалентності капсул рифампіцину.
1.3.4 Високоефективна рідинна хроматографія (ВЕРХ)
ВЕРХ як високочутливий і універсальний метод аналізу, якому в багатьох випадках немає альтернативи, дозволяє одночасно стежити за зміною концентрації кілька лікарських речовин, відрізняється достатньою селективністю, точністю і відтворюваністю. Тому, починаючи з середини 70-х років, він стає основним аналітичним методом для визначення протитуберкульозних ліків у сироватці та плазмі крові [19].
1.3.4.1 Приготування реактивів і зразків при використанні методу ВЕРХ
А. Підготовка пацієнта, забір крові, отримання і зберігання сироватки крові
Після 12-годинного періоду голодування пацієнт повинен прийняти ізоніазид в дозі 10 мг на кожний кг маси тіла. Через 3 ч. після прийому ізоніазиду з ліктьової вени необхідно забрати ін'єкційним шприцом в центрифужну пробірку ...
