ькості використовуваних стрипів.
. В інші лунки внести досліджувані зразки. Залежно від досліджуваного маркера сироватки або розводять 1:10 або 1:5 або не розводять.
. Інкубувати стрипи при температурі 37? С. Час інкубації визначається тест - системою: від 30 хвилин до 2 годин.
. Після закінчення зазначеного часу вміст лунок видалити в ємність для збору інфікованого матеріалу і планшет промивають 4 - 5 разів розчином для промивання.
. У всі лунки внести по 100 мкл розчину кон'югату і витримати планшет в термостаті 30 хвилин при температурі 37? С.
. По закінченні інкубації планшет промити і в усі лунки внести по 100 мкл субстратної суміші.
. Витримати планшет 30 хвилин в захищеному від світла місці при кімнатній температурі.
. Реакцію зупинити додаванням в лунки по 50 мкл стоп - реагенту. Провести облік результатів.
Облік результатів проводиться спектрофотометрически при двох довжинах хвиль - 450 нм і при референс - довжині хвилі в діапазоні від 620 до 680 нм. Реакція враховується, якщо середнє значення оптичний щільності в лунках з позитивним і негативним контрольними зразками відповідають значенням, заданим виробником даної тест - системи. Цей показник є специфічним для кожної тест - системи. Позитивними вважаються зразки зі значеннями, що перевищують або рівними критичного значення оптичної щільності (ОП крит.). ОП крит. розраховується за формулою:
ОП крит. =Ср.знач. ОП (К -) + x,
де значення х визначається типом тест - системи.
Визначення HBeAg і анти - HBc Ig M свідчить про активну реплікацію вірусу гепатиту В і відповідно про стадії розпалу захворювання. Анти - HBc IgG і анти - HBe IgG вказують на завершення гострого періоду. Виявлення анти- HBs-IgG (IgM) і анти- HВe-IgG дозволяє говорити про перенесеної раніше HBV інфекції [Діагностика гепатиту В , 2007].
Наявність в досліджуваних зразках того чи іншого маркера HCV або їх поєднань має важливе діагностичне значення:
IgM (+) і Ig G (+) - загострення HCV - інфекції
IgM (-) і Ig G (+) - латентна фаза гепатиту З
IgM (+) і Ig G (-) - гостра фаза HCV - інфекції.
.5 Проведення полімеразної ланцюгової реакції
Принцип тестування грунтується на екстракції РНК або ДНК збудника з плазми крові спільно з внутрішніми контрольними зразками та проведенні ПЛР - ампліфікації ДНК / кДНК з гібридизаційним - флуоресцентною детекцією в режимі «реального часу». Виявлення мікроорганізмів методом полімеразної ланцюгової реакції з гібридизаційним - флуоресцентною детекцією включає в себе три етапи:
. екстракція (виділення) нуклеїнової кислоти із зразків клінічного матеріалу;
