Для фіксації відрізали від кожної з 10 цибулин кінчики корінців довжиною не більше 1,0 см (ігноруючи найдовші і найкоротші корінці). Зберігали матеріал в холодильнику до приготування препаратів. Гнічені препарати для цитогенетичного аналізу, пофарбовані ацетогематоксіліном, виготовляли за загальноприйнятою методикою [38].
Аналізували по 10-30 проростків у варіанті. У кожному препараті враховували всі клітини на стадіях інтерфази, профази, метафази, анафази і телофази. Для виявлення стадії мітозу, на якій відбувається мітотичний блок, підраховували відносну тривалість фаз мітозу. Можливість ингибирующего або стимулюючого ефектів ВЕКШ оцінювали з використанням метафазну і ана-телофазного методу обліку перебудов хромосом в клітинах кореневих меристем лука. Патологію мітозу (ПМ) підраховували як відношення числа клітин з порушеннями мітозу до загального числа діляться клітин [29] і класифікували окремо для кожного корінця по І.А. Алов з незначною модифікацією [39]. Поряд з абераціями (мостами і фрагментами), враховували інші цитогенетичні порушення, не пов'язані з ушкодженнями хромосом: відставання хромосом в метафазі або при розбіжності до полюсів діляться клітин, їх злипання, асиметричне розташування веретена поділу. Для отримання більш точної оцінки за критерієм «патологія мітозу» обчислювали їх частоту без урахування Профазі. Також підраховували число клітин з мікроядра, відзначаючи їх кількість в клітині і розміри. Перегляд препаратів здійснювали на мікроскопі Leica Gallen III при збільшенні 600. По кожному варіанту було переглянуто більше 20000 клітин.
Після визначення оптимальних концентрацій ВЕКШ (таблиця 2) в першій серії експериментів, виконали другу серію експериментів з використанням опромінених цибулин. Етапи та зміст роботи - аналогічно вищевикладеному.
Таблиця 2 - Схема другої серії експериментів
Варіанти досвіду з облученіемН 2 Про о1 (10 мл в 100 мл Н2О) о3 (0,1 мл в 100 мл Н2О) о6 (0,001 мл в 100 мл Н2О) луковіцикк-о1к-о3к-о6луковіци облученниеI-Кi-о1I-о3I-о6
Статистичну обробку отриманих результатів досліджень проводили на персональному комп'ютері за допомогою програм Statistica 6.0 з розрахунком вибіркової середньої і стандартної помилки середнього.
Для порівняння вибірок по мітотичної активності, частки клітин на стадіях мітозу і по патологій мітозу використовували t-критерій Стьюдента.
3. Результати досліджень та їх обговорення
. 1 Цитогенетичні та морфометричні параметри Allium cepa L. в нормі
китайська дубовий шовкопряд клітина
3.1.1 Морфометрические параметри Allium cepa L
Кореневі меристемних клітини містять певні ензими, що виконують ролі оксидаз, які сприяють перетворенню багатьох немутагенних речовин в мутагенні. Ця система активації дозволяє виявити ті хімічні речовини, які підсилюють свій негативний ефект в процесі метаболізму. Ростові процеси цибулин Allium cepa включають в себе велику кількість клітинного метаболізму: це поділ клітин, насамперед кореневої меристеми, а на наступній фазі росту - листовий меристеми, розтягнення клітин, їх диференціація і т.д. Ми досліджували вплив різних концентрацій екстракту на морфологічні параметри рослин цибулі.
Параметр «число коренів на цибулині» характеризується досить значним рівнем мінливості, від 20 до 32%. Середнє число коренів на цибулині дорівнювало 18-23 (малюнок 1), незалежно від складу водних розчинів, на яких проводили пророщування.
Малюнок 1 - Залежність довжини коренів Allium cepa L. від концентрації водного екстракту лялечок китайського дубового шовкопряда
При оцінці середньої довжини коренів пучка не встановлено істотних відмінностей між більшістю досвідчених і обома контрольними варіантами. Велика частина коренів розвивалася з однаковою інтенсивністю і через 72 години росту їх довжина склала 9,0-10,1 мм.
Достовірне перевищення контрольного значення в к1 (при р lt; 0,01) відзначали у варіанті О4. Коефіцієнт варіації склав 25-38% у варіантах: к1, к2, о1, о3. В інших дослідних варіантах відзначали мінливість на рівні середньої величини 16-19%. Дані результати свідчать про зниження спектра мінливості за параметром «довжина коренів пучка» при обробці цибулин низькими концентраціями екстракту.
Через 12 діб культивування виконували вимірювання довжини всіх коренів на цибулині. При аналізі даного параметра додатково проводили ранжування коренів по довжині, і надалі також працювали з масивом, який включав результати по 10 найдовшим коріння. При обчисленні кореляції між параметрами «довжина всіх коренів на цибулині» і «довжина 10 найдовших коренів на цибулині» було в...
