уючих світіння флюорохромами. Метод ІФ застосовують у різних модифікаціях, зокрема використовують прямий і непрямий варіанти.
Метод прямий ІФ (синоніми: реакція імунофлюоресценції - РІФ, метод флуоресцентних антитіл - МФА) використовують тільки для визначення антигену: виявлення бактерій і рикетсій в мазках, виявлення вірусів в заражених клітинах, вивчення клітинних антигенів.
Прикладом застосування ІФ з метою виявлення вірусних антигенів є діагностика сказу у тварин. Мазки-відбитки мозку загиблих тварин обробляють люмінесціюючої антирабічної сироваткою. При позитивному результаті в цитоплазмі нейроцитів спостерігають грудочки яскраво-зеленого кольору (тільця Бабеша-Негрі), що представляють собою скупчення вірусних нуклеокапсидов. На виявленні антигенів вірусів в мазках-відбитках зі слизової оболонки заснована експрес-діагностика грипу, парагрипу та аденовірусної інфекції.
Метод непрямий флюоресценції (реакція непрямої імунофлюоресценції - РНІФ) володіє рядом переваг в порівнянні з РІФ. Її використовують не тільки для визначення антигенів, але і для титрування антитіл; реакція має більшою чутливістю, тому що дозволяє за допомогою однієї і тієї ж антивидовой міченої сироваткою виявити різні бактеріальні та вірусні антигени при застосуванні в кожному випадку на першому етапі постановки реакції немічених специфічних імунних сироваток. Визначення специфічних антитіл РНІФ є основним методом діагностики геморагічної лихоманки з нирковим синдромом, широко застосовується для діагностики захворювань, що передаються статевим шляхом.
3.8 Імуноферментний аналіз (ІФА)
В
Імуноферментний аналіз (ІФА) проводять у два етапи: перший - взаємодія антитіл з антигеном, другий - ферментативна індикація комплексу антиген - антитіло за рахунок появи фарбування реакційної суміші та реєстрації фарбування візуально або спектрофотометричним методом.
Існують два варіанти ІФА: твердофазний і рідко-фазний, що розрізняються за способом розділення компонентів імунохімічної реакції. У порівнянні з описаними раніше методами виявлення антигенів і антитіл ІФА володіє істотними перевагами:
- високої чутливістю, що дозволяє визначати до 0,05 нг/мл речовини;
- можливістю використання мінімальних обсягів досліджуваного матеріалу (1-2 мкл);
- можливістю інструментального або візуального обліку реакції;
- експресному і можливістю автоматизації всіх етапів реакції.
ІФА в даний час широко використовують у практиці для діагностики багатьох інфекційних хвороб бактеріальної, грибкової етіології, протозойних інфекцій і гельмінтозів, але особливо вірусних інфекцій, зокрема гепатитів А, В, С, D, Е, G, ВІЛ-інфекції, герпесвірусних, ротавірусних, аденовірусних, астровірусних, ПАРВОВІРУСНИЙ і інших інфекцій.
3.9 Імунний блот
Принцип методу імунного блоттинга полягає у виявленні антитіл до окремих антигенів збудника. За допомогою цього методу визначают...
