ь антитіла до антигенів ВІЛ (Глікопротеїну оболонки вірусу, білкам серцевини і ферментам вірусу). Результати імунного блоттинга оцінюють як позитивні, сумнівні та негативні в залежності від кількісного і якісного набору виявлених антитіл.
Необхідно відзначити, що імунний блот поступається по чутливості ІФА, в деяких випадках може реєструватися негативний результат при наявності ВІЛ-інфекції у пацієнта. Однак можливість реєстрації лож-ноположітельних результатів у ІФА при ВІЛ-інфекції вимагає комплексного підходу в діагностиці ВІЛ-інфекції з урахуванням, окрім результатів імунологічних реакцій (ІФА, імунний блот), епідеміологічних і клінічних даних.
3.10 Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР)
Метод ПЛР був розроблений американським біохіміком Кері Мюлліса в 1983 р. на основі застосування відкритої ним термостабільної ДНК-полімерази (Tag-полімерази). Принцип методу полягає в збільшенні в 10 6 -10 8 разів числа копій специфічної ділянки ДНК збудника, катализируемого in vitro ДНК-по-лімеразой в автоматичному режимі.
У штучних умовах відтворення процесу реплікації специфічного для певного виду або роду збудників ділянки геному можливе за умови знання його нуклеотидної послідовності. Застосування методів детекції продуктів реплікації таких ділянок (амплікон) дозволяє констатувати наявність збудника в досліджуваній пробі.
Описане вище комплементарное добудовування ланцюгів починається тільки в певних стартових блоках, що є короткими двунітевие ділянки. При приєднання таких блоків до специфічних ділянок ДНК процес синтезу нової ланцюга направляється тільки в обраному ділянці, а не по всій довжині ланцюга ДНК. Для створення стартових блоків у заданих ділянках ДНК використовують дві оліго-нуклеотидні затравки, які називають праймерами. Праймери комплементарні послідовностям ДНК на лівій і правій межах специфічного фрагмента і орієнтовані так, що добудовування нового ланцюга ДНК протікає тільки між ними.
До переваг методу ПЛР слід віднести:
- високу чутливість, що дозволяє визначати 10-1000 клітин в пробі;
- високу специфічність, оскільки в досліджуваному матеріалі виявляється унікальний для даного збудника фрагмент ДНК;
- універсальність процедури виявлення різних збудників з однієї біопроби;
- високу швидкість аналізу (4-4,5 год);
- можливість діагностики не тільки гострих, але і латентних інфекцій.
ПЛР ефективна для діагностики труднокультівіруемих, некультівіруемих і персистуючих форм мікроорганізмів. Її використання доцільно для виявлення збудників з високою антигенною мінливістю та внутрішньоклітинних паразитів.
Застосування ПЛР ефективно для діагностики широкого спектру бактеріальних і вірусних інфекцій.
У Останнім часом досить успішно реалізуються кількісні методи ПЛР-аналізу, що дозволяють визначити концентрацію збудника в матеріалі (Мікробну або вірусне навантаження), наприклад оціни...
