проводили при температурі відпалу 57 Вє С і концентрацією компонентів:
Таблиця 5. Склад РС для ПЛР. p align="justify"> КомпонентКонцентрація або кількість у РСБуфер для ПЦР1 хdNTP0, 3 мМПрямой праймер5 мкМОбратний праймер5 мкМTaq-pol0, 1 Е.А./мкл
Візуалізацію продуктів ПЛР проводили за допомогою методу електрофорезу в агарозному гелі. За відносної інтенсивності бендів судили про відносну ефективність ампліфікації. br/>
2.11.2 Підбір оптимальних температури відпалу і концентрації хлориду магнію
Готували 24 реакційні суміші, кожній з яких для зручності і наочності було присвоєно умовну назву. Назви реакційних сумішей наведені в таблиці 6. br/>
Таблиця 6. Позначення реакційних сумішей. p align="justify"> праймериматріцаСMg2 +, мМТемпература відпалу, Вє С55, 55759,561 EGFP-3, 2H2O5 В«11В» В«21В» В« 31 »« 41 В»кДНК BHK1, 5 В«16В» В«26В» В«36В» В«46В» 3 В«17В» В«27В» В«37В» В«47В» +5 В«18В» В«28В» В«38В» В«48В»
Для кожної реакційної суміші проводили ПЛР. Візуалізацію продуктів ПЛР проводили за допомогою методу електрофорезу в агарозному гелі. За відносної інтенсивності бендів судили про відносну ефективність ампліфікації. p align="justify"> 2.11.3 Підбір оптимальних концентрацій дезоксинуклеозидтрифосфатов і праймерів
Готували 10 реакційних сумішей з різними умовами проведення реакції. Для зручності і наочності кожної реакційної суміші привласнювали умовна назва. Контрольний експеримент (реакційна суміш В«0В») проводили при максимальній концентрації праймерів (0,5 мкМ) і dNTP (1 мМ) у відсутність ДНК-матриці. Назви реакційних сумішей, що містять матрицю наведені в таблиці 7. br/>
Таблиця 7. Позначення реакційних сумішей. p align="justify"> СdNTP, мкМ Спраймеров, мкМ5025010000, 15 В«1В» В«2В» В«3В» 0,3 В«4В» В«5В» В«6В» 0,5 В«7В» В«8В» В«9В»
Для кожної реакційної суміші проводили ПЛР. Візуалізацію продуктів ПЛР проводили за допомогою методу електрофорезу в агарозному гелі. За відносної інтенсивності бендів судили про відносну ефективність ампліфікації. p align="justify"> 3. Результати та обговорення
Метод придушення експресії гена, використовуючи антисмислового олігонуклеотиди, запропонований більш 15 років тому [], проте роботи над його оптимізацією залишаються актуальними і в даний час. Антисмислового олігонуклеотиди є потенційними терапевтичними агентами, що пригнічують експресію патогенних білків. За останні 15 років розвиток біоорганічної хімії дозволило отримати ряд хімічно модифікованих олігонуклеотидів, які мають поліпшені біологічними властивостями в порівнянні з немодифікованими антисмислового ODN: більшою стійкістю до дії нуклеаз, освітою ...
