з молибдатом амонію, в результаті якої утворюється фосфомолібденовий комплекс:
PO4 + 12 (NH4) 2MoO4 + 21HNO3? (NH4) 3 (PO4? 12MoO3) + 21NH4NO3 + 12H2O
Під дією відновників (аскорбінова кислота) фосфомолібдат амонію переходить в молибденовую синь.
Хід визначення. У пробірку відважують 0,1 г сухого порошку казеїну. Додають 5 мл розчину гідроксиду натрію і ставлять у киплячу водяну баню на 30 хв. p align="justify"> Після охолодження відбирають у пробірку 10 крапель гідролізату і проводять реакцію з біуретовим реактивом, додаючи його 3-5 крапель. Відзначають появу характерного фарбування. p align="justify"> В іншу пробірку вносять 20 крапель гідролізату і нейтралізують його, додаючи по краплях концентровану азотну кислоту до слабкої реакції (за лакмусовим папері, шматочок якої заздалегідь поміщають в пробірку). Потім додають 10 крапель розчину молібдату амонію, перемішують вміст струшуванням і наливають 10 крапель розчину аскорбінової кислоти. Знову перемішують і залишають стояти проби до розвитку специфічного фарбування. p align="justify"> Оформлення роботи. Відзначити результат проведених якісних реакцій, у висновку вказати хімічну природу казеїну молока. p align="justify"> Практичне значення роботи. Якісні реакції на фосфатну групу використовуються для виявлення фосфопротеидов в досліджуваних зразках. br/>
Робота 12. Кількісне визначення вмісту сіалових кислот у сироватці крові методом Гесса
Реактиви. Розчин трихлороцтової кислоти, 10%-ний розчин; оцтово-сірчанокислий реактив (95 мл крижаної кислоти і 5 мл концентрованої сірчаної кислоти). p align="justify"> Обладнання. Штатив із пробірками; піпетки місткістю 1,0; 5,0; центрифуга; водяна баня; ФЕК. p align="justify"> Матеріал. Сироватка крові. p align="justify"> Метод заснований на здатності нейрамінової кислоти, що звільняється при гідролізі сироваткових глікопротеїдів, утворювати забарвлені сполуки при нагріванні з оцтово-сірчанокислим реактивом.
Хід визначення. У центрифужну пробірку вносять 1,0 мл сироватки крові і додають 1,0 мл 10% розчину трихлороцтової кислоти. Пробірку поміщають в киплячу водяну баню точно (!) На 5 хвилин. Охолоджують під струменем води протягом 5 хвилин. Струшують і центрифугують 5 хвилин при 3000 об/хв. Відбирають 0,4 мл надосадової рідини, переносять у пробірку, наливають 5,0 мл оцтово-сірчанокислого реактиву і поміщають на 30 хвилин у киплячу водяну баню. Охолоджують до кімнатної температури і інтенсивність забарвлення визначають на ФЕК при довжині хвилі 500-560 нм (зелений світлофільтр) в кюветі товщиною 10 мм проти контролю. Контролем служить оцтово-сірчанокислий реактив. p align="justify"> Розрахунок. Визначте кількість сіалових кислот за калібрувальним графіком і розрахуйте з одержание за формулою:
а? 5? 100
Х = -----,
1000? 1000
де а - вміст сіалових кислот у досліджуваній пробі в мкг, знайдена за калібрувальним графіком;
- розрахунок на 1 мл сироватки;
(у чисельнику) - для переведення на 1 л сироватки;
(у знаменнику) - для перерахунку в мг та м.
Оформлення роботи. За отриманими значеннями екстинкції зробити розрахунок змісту сіалових кислот в м/л. Перерахувати їх вміст у ммоль/л згідно з формулою:
а? 103
Х = ----,
309
де а - кількість сіалових кислот в г/л;
- переклад г в мг;
- молекулярна вага сіалових кислот.
Практичне значення роботи. У нормі вміст сіалових кислот у сироватці крові коливається від 2,0 до 2,36 ммоль/л (0,62-0,73 г/л). Їх кількість значно зростає при захворюваннях, пов'язаних з деструкцією сполучної тканини, при туберкульозі, інфаркті міокарда, пухлини головного мозга. Зниження вмісту відзначається при перніциозної анемії, хвороби Вільсона, дегенеративних процесах центральної нервової системи. p align="justify"> Робота 13. Хімічна природа нуклеопротеидов
Нуклеїнові кислоти присутні у всіх клітинах (за винятком еритроцитів) організму людини у вигляді комплексу з білками, тобто утворюють Нуклеопротеїни. Вони у великій кількості містяться в селезінці, зобної залозі, печінці та інших органах і тканинах, багатих ядрами. З цих органів простіше виділяти і вивчати Нуклеопротеїни нуклеїнові кислоти. Нуклеопротеїди діляться на дезоксірібонуклеопротеіди (ДНП) і рібонуклеопротєїди (РНП), в яких фосфатні групи ДНК або РНК електростатично взаємодіють з білками. Нуклеїнові кислоти - високомолекулярні з'єднання, що складаються з мононуклеотидів, з'єднаних 3 , 5 ...
