- фосфодіефірнимі зв'язками. Вони погано розчиняються у воді, утворюючи в'язкі гелеподібної розчини. Добре розчиняються в лугах, розчинах мінеральних кислот і солей.
Реактиви. Хлорид натрію, 5%-ний розчин, що містить 0,04% Тризаміщені цитрату натрію; гідроксид натрію, 0,4%-ний розчин; діфеніламіновая реактив *; біуретового реактив *. p align="justify"> Обладнання. Штатив із пробірками; ступка з товкачиком; скляний порошок; піпетки; мірні циліндри місткістю 50 і 300 мл; піпетки місткістю 1 мл; кристалізатор; дерев'яні палички з насічками; водяна баня; круглодонная колба з зворотним холодильником; марля для фільтрування. p align="justify"> Матеріал.
Селезінка, свіжа або заморожена.
Виділений з селезінки дезоксірібонуклеопротеіди.
РНК дріжджова, свіжоприготований 0,1%-ний розчин.
а. Виділення дезоксірібонуклеопротеіда з тканини селезінки. Метод заснований на здатності дезоксірібонуклеопротеіди розчинятися в сольових розчинах великий іонної сили і випадати в осад при зниженні їх концентрації. p align="justify"> Хід визначення. 2/3 г тканини селезінки ретельно розтирають у ступці з скляним порошком, доливаючи поступово невеликими порціями 35-40 мл розчину хлориду натрію. Отриманий в'язкий розчин фільтрують через 2 шари марлі в малий кристалізатор. p align="justify"> Відміряють циліндром шестиразовий (по відношенню до фільтру) обсяг дистильованої води і повільно виливають її в фільтрат. Утворилися нитки дезоксінуклеопротеіда обережно намотують на дерев'яну паличку, переносять у пробірку для використання в подальшій роботі. p align="justify"> б. Якісна реакція на ДНК (реакція дише). Метод заснований на здатності дезоксирибози, що входить в ДНК дезоксірібонуклеопротеіда, утворювати з'єднання синього кольору з дифеніламіном при нагріванні в середовищі, що містить суміш крижаної оцтової і концентрованої сірчаної кислот. З рибозой РНК аналогічна реакція дає зелене забарвлення. p align="justify"> Хід визначення. До Вј частини осаду дезоксірібонуклеопротеіда підливають 1 мл 0,4%-ного розчину гідроксиду натрію (до розчинення). Додають 0,5 мл діфеніламіновая реактиву. Вміст пробірки перемішують і ставлять на киплячу водяну баню на 15-20 мін.
Аналогічну реакцію виконують в іншій пробірці з 1 мл розчину РНК. Відзначають характерне фарбування в пробах. p align="justify"> в. Виявлення білкового компонента дезоксірібонуклеопротеіда (ДНП). Метод заснований на биуретовой реакції (описана в роботі 1). p align="justify"> Хід визначення. Переносять частина отриманих раніше ниток ДНП в пробірку, додають 0,5 мл розчину гідроксиду натрію до розчинення ниток і 5 крапель біуретового реактиву. Спостерігають за появою фарбування. p align="justify"> р. Гідроліз дезоксірібонуклеопротеіди. p align="justify"> Хід визначення. Частину осаду дезоксірібонуклеопротеіди, отриманих з тканини селезінки, поміщають в колбу для гідролізу, додають 30-40 мл 5%-ного розчину сірчаної кислоти. p align="justify"> Закривають колбу пробкою із зворотним холодильником і обережно кип'ятять вміст на азбестового сітці на повільному вогні протягом 30-40 хв. Отриманий гідролізат охолоджують і використовують для визначення складових компонентів ДНК у подальшій роботі (гідролізат зберігати в холодильнику). p align="justify"> Оформлення роботи. У висновку відзначити можливість виділення нуклеопротеидов за допомогою сольових розчинів та їх ідентифікації з допомогою реакцій на нуклеїнових компонент. p align="justify"> Практичне значення роботи. Виділення та очищення дезоксірібонуклеопротеіди з гомогенатов і ядер клітин за допомогою розчинів хлориду натрію різної концентрації використовують в експериментальній біохімії. Діфеніламіновая проба лежить в основі методів якісного та кількісного визначення нуклеопротеїдів і нуклеїнових кислот в біологічному матеріалі. У клінічній цитології ці реакції застосовують при нативної забарвленні нуклеїнових кислот, наприклад, в мазках клітин крові. br/>
НУКЛЕЇНОВІ КИСЛОТИ
При гідролізі Нуклеопротеїни нуклеїнові кислоти розпадаються на складові частини. Виявлення і методи кількісного визначення нуклеїнових кислот і їх мономерів (нуклеотидів) в біологічному матеріалі і препаратах засновані на особливостях хімічної природи визначених сполук. br/>
1. Дослідження хімічної природи нуклеїнових кислот
ДНК і РНК, маючи схожість в будові, дещо відрізняються за складовими компонентами: в ДНК міститься тимін, а в РНК - урацил. Крім того, вуглеводна частина в ДНК представлена ​​дезоксирибозою, а в РНК - рибоза. Тому за специфічними реакцій на ці моносахариди можна виявити відповідні нуклеїнові кислоти і нуклеоти...
