TUNEL Annexin V імунодетекції (антитіла до каспазой) Електрофорез ДНК Флуоресцентні барвники (Hoechst) мишьДінаміческій стрес, ішемія/реперфузіякролікАутоіммунная кардіоміопатія, ишемия/реперфузиясвиньяИшемия/реперфузиясобакаХроническая серцева недостатність, мікроемболізація коронарних артерійчеловекІшеміческая хвороба, аритмогенного дисплазія правого шлуночка, гострий інфаркт міокарда Вивчення апоптозу кардіоміоцитів у тварин:
. Для серця дорослих щурів характерно розвиток масового післяінфарктного апоптозу кардіоміоцитів, що приводить до загибелі організму. Дослідження ушкоджуючої дії аноксії в основному проводиться на клітинах з культури кардіоміоцитів, а не в системі in situ.
У роботі В.Б.Сапруновой і співавторів в якості моделі постінфарктного стану тканини серця були використані ізольовані шматочки міокарда, які инкубировались в умовах аноксії (72 години). Після цього було проведено комплексне дослідження певних параметрів: подих зрізів, ультраструктури мітохондрій і межнуклеосомной фрагментації ДНК. Паралельно, в аеробних умовах, на цій моделі були досліджені зміни ультраструктури мітохондрій під впливом TNF-?. Проведені дослідження продемонстрували протікання апоптозу в умовах експерименту (за допомогою методів електронної мікроскопії, виділення та електрофорезу ДНК) [3].
Однією з причин зростання числа кардіоміоцитів з ознаками апоптозу при різних патологіях серця може бути підвищення активності адренергічної системи (дія високих доз катехоламінів підсилює апоптотического загибель кардіоміоцитів).
Для індукції апоптозу кардіоміоцитів лівого шлуночка серця щурів Л.С. Погодіна і співавтори використовували синтетичний аналог адреналіну - ізопротеренол (ІЗП), що викликає розвиток «кальцієвого» пошкодження мітохондрій, згодом що сполучається з ішемією кардіоміоцитів через посиленого скорочення серцевого м'яза. Для виявлення апоптотичних кардіоміоцитів застосовували метод TUNEL. Було встановлено, що в осередках пошкодження присутні три види кардіоміоцитів; показано, що апоптоз переважає на початку розвитку вогнища ушкодження (4-18 год), а на більш пізніх стадіях (24-48 год) - швидше за все некроз. [6]
Для вивчення ролі апоптозу у розвитку коронарної хвороби серця Маншаріпова А.Т. і співавтори використовували експериментальну модель стрес-індукованої коронарної недостатності. З метою моделювання коронарної недостатності щури піддавалися стресового впливу у вигляді тривалої іммобілізації тварин лежачи на спині протягом 8-ми годин щодня впродовж 11-ти днів. Дія стресу виражається в зниженні рівня оксиду азоту в крові і міокарді. Апоптотичні кардіоміоцити визначалися методом TUNEL. Було показаний масивний характер апоптозу при моделюванні коронарної недостатності (з 3 дня); відзначалася пряма залежність розширення зони апоптозу від тривалості стресового впливу [7].
Також у щурів шляхом оклюзії лівої коронарної артерії моделювали необоротну ішемію, потім досліджували потенційно протекторну дію препарату Семакс. Як і при введенні семакса, так і без нього при аналізі методом TUNEL не спостерігали апоптотических клітин в міокарді після 2:00 30 хвилин, однак без введення даного препарату кардіоміоцити мали значні порушення основних органел. Таким чином, Семакс відстрочив поява патологічних змін в ультраструктурі ішемізованих кардіоміоцитів [9].
H. Fliss і співавтори на моделях ішемії (оклюзія лівої коронарної артерії, 2, 25 ч) і ішемії (45 хв) з подальшою реперфузією (1-4 год) показали, що як ішемія, так і реперфузія ведуть до апоптотической загибелі кардіоміоцитів. На відміну від попередньої роботи Buerke M і співавторів на серце щурів по вивченню дії реперфузії на апоптоз (20 хв. Ішемія/24 ч реперфузія) [15], в даному дослідженні було відмічено, що розвиток апоптозу після реперфузії відбувається набагато швидше, ніж вважалося раніше (досить 1 ч реперфузії). Апоптоз кардіоміоцитів оцінювали за допомогою ISEL методу і «драбини» ДНК в агарозному гелі. За даними дослідження реперфузія зменшує область апоптозу в зоні ішемії міокарда, але, в той же час, вона здатна підсилювати залишковий апоптоз, можливо через пошкоджуючого ефекту реперфузії (потужна генерація активних форм кисню). [10]
Модель механічного перерастяжения кардіоміоцитів сосочкових м'язів серця щурів описана Cheng з колегами, при цьому виявлено присутність апоптотичних кардіоміоцитів (21%).
2. Можна виділити ряд робіт, в яких проводився аналіз загибелі кардіоміоцитів у мишей з генетичними аномаліями або у трансгенних тварин.
Михайлов В.М. і співавтори використовували у своїй роботі тварин з генетичним дефектом - мишей mdx, у яких порушення синтезу дистрофина в кардіоміоцитах супроводжувалося розвитком окисного стресу, що викликає у свою чергу загибель клітин. У таких ...
