у на диференціальної середовищі зростання відсутня, то наступні висіву проводять щодня протягом 7 діб. При відсутності зростання на 8 добу дається негативна відповідь. При слабо вираженою бактеріємії зростання збудника в ряді випадків виявляється на 2 - 3 тижні витримування посівів в термостаті. У сумнівних випадках тому рекомендується робити висіву до 24-го дня з моменту взяття матеріалу, незалежно від отримання негативного результату на 8-у добу дослідження.
На третій день дослідження реєструється результат посіву на "короткий строкатий рядВ» або середу Ресселя, вивчається морфологія і чистота виділених культур шляхом приготування мазків і забарвлення їх за Грамом, визначається рухливість. Відібрані культури пересівають на В«довгий строкатий рядВ», ставлять орієнтовну, потім розгорнуту реакцію аглютинації. Реєструють результати посіву культури з косого агару на В«Довгому строкатому рядуВ», враховують титр реакції аглютинації і на підставі сукупності отриманих даних роблять остаточний висновок. У разі інагглютінабільності виділеного штаму ставлять реакцію аглютинації на склі з Усивороткой, оскільки культури, виділені з організму хворого, можуть бути в у-формі . За відсутності агглютінабпльностп з 1-сироваткою проводять 3-4 щоденних пасажу на жовчному 10% бульйоні. При неможливості провести реакцію аглютинації з У-сироваткою реакція аглютинації ставиться з Гретою (прогрівання при 60 В° протягом 30 хв.) або кип'яченої (кип'ятиться при 100 В° 5 хв.) суспензією досліджуваного штаму.
За наявності нечітких результатів щодо біохімічної активності або агглютінабільності виділеної культури остаточний відповідь не видається, а на четверту добу продовжують вивчення чистих культур, отриманих з колоній з диференціальної середовища.
Виділена культура може бути тіпірованних специфічними У1-фагами. При цьому вона повинна бути в у-формі (містити У1-антиген). Чистий у-форма аглютинується У-сироваткою і не аглютинується О-сироваткою; у у-форма аглютинується тієї та іншої сироваткою; В»-форма аглютинується тільки О-сироваткою. Культура, що знаходиться в у у-формі, для звільнення від У-форм розсіюється на чашку Петрі, і потім відбираються колонії, що не аглютинуються О-сироваткою. Від теформ можна також звільнитися за допомогою О-сироватки або сироватки Гертнеа. У центрифужну пробірку наливають мл бульйону і в ньому розводять О-сироватку 1: 20-1: 50. У розведену сироватку вносять петлю добової агарової культури. Пробірки поміщають у термостат на 10 хв. і потім центрифугують при 3-5 тисячах обертів протягом 10 хв. Пробірки знову поміщають у термостат на 30 хвилин і центрифугують 10 хвилин. Верхній шар рідини розсівають на чашки з агаром.
Після 18-20-годинної інкубації при 37 В° виділяють колонії під контролем О-сироваток.
типування піддається 3-4-годинна бульйонна культура. Вона наноситься на чашку з 1,1% прозорим агаром платинової петлею або пастерівською піпеткою у вигляді секторів по числу наявних типів фага. Після цього чашка підсушується в термостаті протягом 30 хв. На висохлі краплі мікробної суспензії наносяться платинової петлею однакові обсяги типових фагів в критичному тест-розведенні (вказується на етикетці ампули). Чашки поміщають у термостат і на наступний день оцінюється результат. Деякі типи культур можуть давати групову реакцію з іншими типами фагів. Близько 15% культур з числа містять У1-антиген НЕ типирь. p> Для скорочення термінів дослідження Московський інститут вакцин і сироваток ім. Мечникова та деякі інші інститути використовують строго специфічні імонорецепторние сироватки. Посів і дослідження на 2-у добу при цьому проводиться, як описано вище. На 3-й день вивчаються мазки, пофарбовані по Гранові, і залежно від біохімічної активності на лактозі і глюкози ставиться реакція аглютинації на склі з О-і потім Н-сироватками. Н-сироватка вибирається залежно від групової приналежності штаму (А, В, С, Б). За сукупності даних на 3-й день дається остаточну відповідь. За наявності непарних результатів культури досліджуються, як зазначено вище.
Для посіву крові за методом Блінкін в плоских флаконах ємністю в 200 мл на одній стінці скошується агар з 1% глюкози і індикатором Андреде, на другий - з 1% лактози з цим же індикатором. РЬ середовища при заготівлі встановлюється = 7,6. У флакони вносять 50 мл 50% жовчного бульйону або 50% жовчну воду і в цю середу засівають не менше 10 мл крові. Посів поміщають в термостат при 37 В° на 12 годин. Потім, нахиляючи флакон в одну, а потім в іншу сторону, змочують поверхні агару з глюкозою і лактозою. Результат посіву розглядається через добу. При відсутності росту змочування агарових пластинок повторюють, і посів повторно розглядається через 12 годин.
Для судження про ступінь бактеріємії кров в кількості від 0,5 до 2 мл змішують з 8 мл розтопленого і охолодженого до 45 В° поживного агару, і суміш виливають у стерильну чашку Петрі. Через 24-48 годин підраховую...
