ося старіння, первинний каллус через 4-6 тижнів переносять на свіже живильне середовище. p align="justify"> Цю операцію називають пассированием. При регулярному пасирування здатність до поділу може підтримуватися протягом десятків років. p align="justify"> Використання культури протопластів.
Відсутність клітинної стінки у протопластів обумовлює їм властивості, відмінні від цілих клітин. Завдяки тому, що протопласти здатні поглинати макромолекули і органели, їх використовують як реципієнтів при трансформації, а також в експериментах з клітинної селекції та мутагенезу. Ізольовані протопласти служать джерелом для виділення непошкоджених і функціонально активних субклітинних і цитоплазматичних структур і органел (хлоропластів, ядер, хромосом). p align="justify"> Здатність протопластів зливатися один з одним знайшла застосування для отримання соматичних гібридів.
Ізольовані органи рослин застосовують для синтезу БАР.
2. Ферменти використовуються в генетичній інженерії (рестриктази, лігази) і механізм їх дії
Рестриктази - це ферменти, за допомогою яких отримують фрагменти ДНК.
Лігази - ферменти, що з'єднують фрагменти ДНК.
Розщеплення ДНК у специфічних ділянках нуклеотиднихпослідовностей здійснюється особливими ферментами - рестрікцірующімі нуклеазами, здатними зруйнувати чужорідну ДНК. Всі ферменти можна умовно розділити на такі групи:
) використовуються для отримання фрагментів ДНК;
) синтезують фрагменти ДНК на матриці РНК;
) з'єднують фрагменти ДНК;
) дозволяють здійснити зміну структури решт фрагментів ДНК;
) застосовувані для приготування гібрідізаціонних проб.
Кожен фермент, здатний зруйнувати чужорідну ДНК, пізнає в ній послідовність з 4 ... 6 нуклеотидів. В даний час випускається більше 100 різноманітних рестріктаз. Кожен фермент пізнає різні послідовності нуклеотидів і специфічно розриває їх. При розриві утворюється серія фрагментів, звана рестрикційної (рестрікта), з тупими або липкими кінцями. Переважно розривається двунітевая ДНК. br/>В
Рисунок 1 - Ділянки впізнавання ДНК трьома рестріктазами з Haemophilus parainfluenzae (HpaI); Escherichia coli (EcoRI) і Haemophilus influenzae ( HindIII)
Багато рестриктази вносять розриви в два ланцюги ДНК зі зміщенням на кілька нуклеотидів і утворенням на кінцях фрагментів коротких одноланцюгових ділянок. Вони здатні утворювати комплементарні пари основ з будь-яким іншим одноланцюговим ділянкою, отриманим за допомогою того ж фрагмента (липкі кінці). Липкі к...
