(проба) Результат реакції
У висновку вказати на присутність аналізованих фосфоліпідів у тканині мозку і практичну значимість проведеного дослідження.
Практичне значення роботи. У клініко-біохімічних дослідженнях якісні реакції на фосфоліпіди та їх компоненти використовуються для виявлення їх в екстрактах біологічного матеріалу, а у фармації - при аналізі лікарських препаратів, що містять фосфоліпіди. При поділі фосфоліпідів ці реакції застосовуються для прояву хроматограм, а також для розробки методів кількісного визначення фосфоліпідів. br/>
Робота 18. Якісні реакції на стероїди
Стероїдні сполуки - стерини та стеридів, широко поширені в тваринних і рослинних організмах. Типовим представником стероїдів організму тварин (зоостерінов) є холестерин, який знаходиться в тканинах і рідинах у вільному вигляді або у вигляді холестерідов, тобто ефірів пальмітинової, стеаринової або олеїнової кислот. Особливо багата холестерином нервова тканина, де його міститься до 20-30 г/кг, причому найбільше холестерину в білій речовині головного і спинного мозку, де його концентрація досягає 40-55 г/кг. Високо вміст холестерину в ланолине, який використовується у фармації для приготування мазей. p align="justify"> Холестерин витягується з біологічного матеріалу хлороформом, гарячим етиловим спиртом, діетіловим ефіром, ацетоном та ін На практиці найчастіше використовують суміші органічних розчинників. У воді холестерин набухає і утворює емульсії; на відміну від інших ліпідів він не руйнується під дією концентрованих лугів. p align="justify"> До рослинних стеринам (фітостерини) відносяться ергостерин, стигмастерин, ? - ситостерин, фукостерін, які містяться в рослинних оліях , плодах, водоростях і т.д. У лікарських рослинах (наперстянка, горицвіт, конвалія, кендирь та ін) є серцеві глікозиди, аглікони яких представляють собою теж скелет стерана.
Реактиви. Сульфат кальцію (гіпс), порошок; хлороформ; сірчана кислота, конц.; Оцтовий ангідрид; суміш формаліну з конц. сірчаної кислотою (1:50).
Обладнання. Штатив із пробірками; ваги аптечні; ступка з товкачиком; скляна пластинка (100х100 мм); лопаточка; воронка з паперовим фільтром; сушильну шафу, відрегульований на 60? С; скальпель; піпетка місткістю 5 мл; очні піпетки.
Матеріал.
Мозок лабораторного тварини.
Рослинна олія.
Для виділення холестерину 3 г тканини мозку ретельно розтирають з дворазовим кількістю гіпсу. Густий гомогенат розподіляють лопаткою по скляній пластинці і висушують в сушильній шафі при 60? С. Висушену масу зчищають скальпелем в суху ступку, розтирають і переносять у суху пробірку. У пробірку додають 6 мл хлороформу і вміст збовтують +5 хв. Відфільтровують хлороформний екстракт через сухий паперовий фільтр в суху пробірку і проробляють з ним перераховані нижче реакції. <В
а. Реакція Гупперт-Сальківського. Метод заснований на дегідратації молекули холестерину під дією концентрованої сірчаної кислоти з утворенням холестерілена, що має червоне забарвлення. p align="justify"> Хід визначення. У пробірку наливають 1 мл хлороформного екстракту мозку і обережно подслаівают по стінці пробірки 1 мл концентрованої сірчаної кислоти. Пробірку легко струшують. На кордоні двох рідин з'являється кільце червоного кольору, потім вся рідина приймає послідовно червону, помаранчеву і червоно-фіолетове забарвлення. br/>В
В
б. Реакція Лібермана-Бурхарда. Метод заснований на дегідратації холестерину з подальшим з'єднанням двох утворилися молекул холестерину в біхолестадіен:
Біхолестадіен в присутності оцтового ангідриду і сульфокислоти дає сульфопроізводние зеленого кольору.
Хід визначення. У суху пробірку наливають 2 мл хлороформного екстракту мозку і додають в неї 10 крапель оцтового ангідриду і 2 краплі концентрованої сірчаної кислоти. З'являється спочатку червоне забарвлення, що переходить потім у синьо-зелене і зелене. p align="justify"> в. Реакція Вітбі. Метод, як і у попередніх реакціях, заснований на утворенні забарвлених похідних дегідратованого і окисленого холестерину під дією сірчаної кислоти. p align="justify"> Хід визначення. В одну пробірку вносять 2 мл хлороформного екстракту мозку, в іншу - 2-3 краплі рослинного масла і 1 мл хлороформу. В обидві проби додають по 20 крапель суміші формаліну із сірчаною кислотою і струшують. Розчини діляться на два шари - верхній (хлороформний) забарвлюється в яскравий вишневий колір, нижній (кислотний) - у тьмяний буро-червоний із зеленою флуоресценцією. p align="justify"> З хлороформного шару обох пробірок відбирають піпеткою кілька крапель, переносять в інші (сухіе!...
