реплицируются за типом котиться кільця (RCR плазміди), а внаслідок роз'єднаності синтезу лідируючої і відстає ланцюгів, в процесі реплікації утворюється одноланцюжкова ДНК, яка сильно стимулює рекомбінацію між гомологічними послідовностями (Ehrlih et al, 1986). Одноланцюговий надріз, утворений під час ініціації реплікації, також може бути причиною рекомбінації (Michel, Ehrlich, 1986; Baliester et al., 1989; Gros et al., 1989). Крім того, вставки ДНК можуть викликати утворення високомолекулярних конкатемеров, збільшуючи число копій плазміди (Gruss, Ehrlich, 1989; Dabert et al., 1992), що може підвищити частоту рекомбінації, а також посприяти відбору плазмід, які втратили вставки. p> Існує також інший тип плазмід, реплицируется відповідно до механізму тета-типу. При реплікації за цим механізмом не утворюється інтермедіатів у вигляді одноцепочечной ДНК, і з цієї причини вектори, створені на основі тета-репліконов набагато стабільніше і, отже, ефективніше векторів на основі RCR плазмід. Перші дані про це були отримані в експериментах з отримання та вивчення властивостей клонирующих векторів pHV1431, pHV1432, pHV1435 і pHV1436 (Janniere et al., 1990).
Човниковий вектор pHV1436 (рис. 1) був створений на основі реплікону плазміди pTB19. На основі реплікону pAMb1 були сконструйовані три клонирующих вектора: pHV1431, і отримані з нього pHV1435 (шляхом інверсії rep-області pAMb1) і вектор pHV1432 (шляхом делеції невеликого фрагмента в послідовності rep-області pAMb1). <В
Рис. 1. Структура клонирующих векторів. ori pTB52 і ori pAMb1, Реплікаційний регіони природних плазмід pTB19 і pAMb1 відповідно; pBR322, послідовність pBR322, що включає її реплікаційний регіон; - ген стійкості до хлорамфеніколу.
Дані вектори виявилися структурно набагато більш стабільними, ніж вектори на основі сигма-репліконов (Janniere et al., 1990):
(1) при їх використанні спостерігається набагато нижча частота рекомбінації між повторюваними послідовностями (знижена в 1000 разів)
(2) з їх допомогою можна клонувати значно більш довгі сегменти ДНК; середній розмір вставки 10 і 1 kb, з діапазоном 3 -17 kb і 0.1 - 1.7 kb для векторів на основі тета і сигма репліконов відповідно
(3) на відміну від RCR плазмід вони здатні до стабільного підтримання великих сегментів ДНК
Дані властивості характерні і для інших векторів, що є похідними тета-плазмід. Крім того, було показано, що на відміну від сигма-плазмід, тета-реплікони, зі вставками або без них, не утворюють або утворюють незначне число високомолекулярних конкатемеров (Gruss, Ehrlich, 1988; Dabert et al., 1992a; Dabert et al., 1992b). Це також є однією з причин їх структурної стабільності.
Крім клонирующих векторів для Bacillus subtilis був створений ряд векторів спеціального призначення: вектори експресії, клонування промоторів і термінаторів, вектори з регульованою копійних і т.д. При цьому використовуються...
