инок. p align="justify"> Існує кілька модифікацій непрямого методу, найбільшу увагу з яких заслуговує метод з використанням компліменту. Було доведено, що комплімент, фіксований на першій ступені непрямого методу, може бути виявлений фарбуванням його на другому ступені флуоресціюючої сироваткою, імунною до сироватці, що послужила джерелом комплементу. p align="justify"> Користуючись методом флуоресціюючих антитіл, краще використовувати їх глобуліновие фракції. Є багато способів виділення глобулінів із сироватки крові: висолювання сірчанокислим амонієм, сірчанокислим натрієм; осадження етиловим спиртом, риванолом. До методів найбільш щадним молекули білків, можна віднести препаративний електрофорез і поділ за допомогою обмінників. p align="justify"> Для люмінесцентної мітки сироваток або їх глобулінових фракцій використовують спеціальні флуорохроми. Найбільш поширені - ізоціанату і ізотіоціонатфлуоресцеіна, 1-диметил-амінонафталін-5-сульфохлорид, ізоціанати родаміну В, изотиоцианат родаміну В-200, хлорид-3-гідроокису-5-8-10-пірен-три-сульфокислоти. p align="justify"> При дослідженні гістологічних зрізів, тканинних культур, клітин велике значення має характер власної флуоресценції цих об'єктів. Більшість тканин володіє жовто-зеленим світінням. Тому для диференціювання корисно використовувати сироватки, мічені сполуками родаміну. ​​p align="justify"> Найбільш хороші результати дає мічення білків сполуками типу ізотіоціонатафлуоресцеіна і ізотіоціанати родаміну В-200.
З'єднання (кон'югування) білків сироваток або їх глобулінових фракцій з флуорохромами можна проводити різними способами. Для ізоціанатафлуоресцеіна метод розроблений Кунсом і зводиться до наступного. p align="justify"> Визначається загальна кількість білка сироватки (глобулінів), що підлягає мічену. Користуючись рефрактометром або таблицею Рейса або мікрометодомК'ельдаля. Знаючи кількість білка, що підлягає мічену, складається реакційна суміш. Загальна кількість суміші має бути таким, щоб зміст білка в ній було дорівнює 1 відсотку. До складу суміші входять: карбонат-бікорбанатний буферний розчин 0,5 М, рН 9,0-15%, діаксан 15%, ацетон 7%, ізоціанатфлуоресцеіна 5 мг на 100 мг білка. До 100% обсягу суміш доводять 0,15 М розчином хлористого натрію. Якщо ізоціанатфлуоресцеіна використовують у формі розчину в суміші діаксан-ацетон, то слід відповідно зменшити кількість цих реактивів у загальній кількості суміші. Зазвичай розчини ізоціанатафлуоресцеіна містять 1 частина діоксану і 2 частини ацетону. p align="justify"> Складові реакційної суміші з'єднують за 4 0 , постійно помішуючи, і вносячи кожен компонент по краплях, використовуючи магнітну мішалку . Суміш ставлять у холодильник на 16-18 годин.
Зазвичай використовують 2 методи мітки изотиоцианатомфлуоресцеина.
Метод Риггса. До охолодженої до 0-0,5
