хлорофілів: феофитина і феофорбідов відрізняються від активного хлорофілу відсутністю в центрі їх мелекули атома магнію і хлорофиллид, в молекулі якого, порівняно з хлорофілом, немає лише фітольной групи.
екстрактно флуорометріческій метод визначення вмісту хлорофілу заснований на реєстрації інтенсивності флуоресценції його в розчині при порушенні світлом видимої або ближній ультрафіолетовій області спектра. Цей метод застосовується для визначення вмісту хлорофілу при його концентрації менше I мкг / л, тобто для дистрофні і олиготрофних водойм. Чутливість флуорометріческого методу визначення вмісту хлорофілу в порівнянні зі спектрофотометрическим в 100 разів більше.
Виборче збудження флуоресценції пігментів світлом різної довжини хвилі дає можливість визначити концентрацію різних пігментів в їх суміші. Застосування відповідних фільтрів поглинання і флуоресценції дає можливість селективно оцінювати концентрацію різних хлорофиллид і продуктів їх руйнування [3].
Вивчення багатого набору пігментів водоростей вельми важливо для розуміння функціонування первинної ланки в трофічного ланцюга та екосистеми водойми в цілому. Це не можливо без хроматографічного розділення пігментів. Цей метод також відноситься до екстрактивних і дозволяє провести якісне поділ хлорофілів і каротиноїдів, відокремлювати їх від небажаних домішок і отримувати пігменти в чистому вигляді. В основу хроматографічних методів покладено принципи адсорбційної і розподільної хроматографії.
Безекстрактние методи визначення вмісту хлорофілу припускають реєстрацію його концентрації без екстрагування пігментів з клітин розчинником. Концентрацію пігментів вимірюють за допомогою спеціально пристосованих спектрофотометрів, занурених Флуоріметри та інших оптичних приладів. Безекстрактние методи вільні від помилок і труднощів, пов'язаних з приготуванням екстрактів і неповнотою вилучення пігментів у зв'язку з міцністю утримування їх хлорофіл-білково-ліпідних комплексами клітинних структур, труднощами проходження розчинників через біологічні мембрани.
Однак безекстрактние методи пов'язані з наявністю складної оптичної апаратури, необхідністю стабілізації енергоживлення приладів, що працюють в польових умовах. Крім того, між виміряними спектрами оптичної щільності, мутностью розчинів, як і спектром флуоресценції зразка і концентрацією пігментів, існують досить складні залежності.
До безекстрактним спектрофотометрическим методів відносять визначення концентрації пігментів в природних умовах за допомогою погружаемого у воду спектрофотометра; безпосередньо в зразках води, що заливається в спеціальну кювету з дзеркальними стінками, а також запропонований Енче метод визначення пігментів у клітинах фітопланктону, обложених на мембранних фільтрах. Перед спектрофотометрією останні прояснюють спеціальними розчинниками для оптичної прозорості.
Значний інтерес представляє флуорометріческій безекстрактний метод визначення хлорофілу безпосередньо в живих клітинах фітопланктону, що знаходяться у водоймі. Показана перспективність застосування флуорометріческіх методів в організації екологічного моніторингу Дунаю. Теоретичне обгрунтування флуоресцентних методів визначення хлорофілу і його розподілу по основних таксономічних груп фітопланктону пов'язано зі здатністю цього пігменту флуоресцировать під впливом спе...
