раціях клітку поміщають в спеціальну камеру, куди також вводять інструменти. Останнім часом також широко використовуються лазерні мікропучков і мікропучков UV спектру. Їх застосовують для точкового поразки клітини в ході дослідження.
. 6.3 Метод флуоресцентної мікроскопії
Метод отримання збільшеного зображення з використанням свічення збуджених атомів і молекул зразка. У флуоресцентному мікроскопі зразок опромінюється світлом з більшою частотою, а зображення отримують в оптичному спектрі. Зображення флуоресцентного препарату може сфотографовано спеціалізованої цифровою камерою, що дозволяє робити знімки з великою витримкою. Досить часто використовуються речовини здатні до флуоресценції або ж в клітку ін'еціруются флуоресцентні агенти
Одним з видів флуоресцентної мікроскопії є конфокальна мікроскопія - метод, що дозволяє отримувати зображення з деякої глибини в середині зразка.
1.6.4 Метод конфокальної скануючої світлової мікроскопії
конфокальную світловий скануючий мікроскоп використовують для отримання тривимірної реконструкції об'єкта. З його допомогою отримують серію послідовних зрізів клітини, взятої з різної глибини. Після цього спеціальна комп'ютерна програма зводить ці зображення воєдино і ми можемо отримати об'ємне, тривимірне зображення об'єкта.
. 7 Вивчення фіксованих клітин
Багато дані про пристрій і функціонування клітини були отримані саме на фіксованих клітинах. Фіксація - складний процес, спрямований на вбивство клітини, припинення активності клітинних ферментів, розпаду компонентів, уникнути втрати структур і речовин, а також їх придбання, якщо вони були відсутні в живій клітині. Але, на жаль, ще не існує фіксатора, який би задовольняв всім цим вимогам.
. 7.1 Методи цитохимического аналізу
Це ряд прийомів фарбування, головною метою якого є виявлення специфічних хімічних речовин клітини. Існує цілий ряд прийомів фарбування, прямо що виявляють ті чи інші речовини. До таких цитохімічним реакціям висувають вимоги: специфічність зв'язування барвника, незмінність локалізації речовини. Приклад такої реакції це реакція на ДНК - Фельгена.
. 7.2 Метод цитофотометрії
Даний метод дозволяє кількісно виміряти кінцевий продукт цитохімічної реакції. Він грунтується на визначенні кол-ва речовин з поглинання ними світла певної хвилі. Інтенсивність поглинання променів пропорційна концентрації речовини при одній і тій же товщині об'єкта. Для цього методу використовують мікроскопи-цитофотометрія (за їх об'єктивами розташований чутливий фотометр). Цей метод широко використовується при визначенні кількості ДНК після реакції Фельгена. Також можна провести кількісну оцінку не тільки поглинають світло речовин, але і його випромінюючих. На цьому грунтується флуорометрія.
. 7.3 Метод імунохімічного дослідження (иммунохимические реакції з використанням флуоресцентних антитіл)
Метод володіє високою чутливістю і специфічністю. Існують методи прямої і непрямої імунофлуоресценції, у першому випадку антиген зв'язується з антитілом, кон'югованим з флуоресцентною міткою (флуорохромом, наприклад, FITС або TRITC, у другому ж антиген зв'язується з некон'югірованная специфічним антитілом (первинним антитілом). Флуоресцентна мітка Кон'юговані із вторинним антитілом, специфічним до Fc-фрагменту первинного антитіла. Непрямий метод більш чутливий, ніж прямий метод. За світінням флуорохромов знаходять місця локалізації шуканих білків у клітині. Але для того, щоб мічені антитіла проникли в клітку потрібно зробити мембрану більш проникною. Зазвичай це досягається фіксацією клітин і часткової екстракцією ліпідів з мембран.
. 7.4 Метод радиоавтографии
Даний метод використовується для виявлення локалізації місць синтезу біополімерів, визначення шляхів перенесення речовин в клітині, спостереження за міграцією або властивостями клітин. Для цього застосовують реєстрацію речовин, мічених ізотопами. Спосіб повторює метод Беккереля. У середу з клітинами вводиться попередник одного з речовин, в якому один з атомів заміщений а радіоактивний ізотоп. У процесі синтезу мічений атом потрапить в саму молекулу і її можна буде зареєструвати за допомогою фотоемульсії. Точність цього методу залежить від величини зерна AgBr і від енергії частинки. Тому для методу радиоавтографии використовують спеціальну дрібнозернисту фотоемульсію та ізотопи з малою енергією. Радіоавтографіческі не можна вивчати розчинні у воді сполуки, тому що атоми можуть загубитися.
. 7.5 Метод молекулярної гібридизації
Застосування попереднього методу спільно з ...
