ешті, червоне забарвлення. p align="justify"> Відзначають з точністю до 0,5 хв час від початку досвіду до появи в кожній з чотирьох пробірок червоного фарбування - стадія освіти Ерітродекстріни з крохмалю.
Оформлення роботи. Результати зобразити графічно, відкладаючи по осі ординат v - швидкість реакції (величина, зворотна часу утворення Ерітродекстріни), а по осі абсцис [C] - відносну концентрацію амілази (розведення). Зробити висновок про залежність швидкості реакції від концентрації ферменту і порівняти з тією ж залежністю для небіологічних каталізаторів. p align="justify"> б. Залежність швидкості ферментативної реакції від температури. Метод заснований на визначенні швидкості гідролізу ? - амилазой слини крохмалю в залежності від температури.
Хід визначення. У пробірку поміщають 5 крапель слини, кип'ятять 1-2 хв на водяній бані і остуджують. У дві інші поміщають по 5 крапель накопичений слини. p align="justify"> Вносять у всі проби по 10 крапель розчину крохмалю і ставлять першу і другу пробірки у водяну баню при 38 Вє С, а третю - у воду з льодом або снігом на 3 хв. Потім додають у кожну пробірку по 1 краплі розчину йоду в йодиді калію і порівнюють що розвивається забарвлення. p align="justify"> Оформлення роботи. Дані оформляють у вигляді таблиці, роблять висновок про залежність ферментативної реакції від температури і причини цієї залежності. br/>
ФерментСубстратОкрашивание з іодомТемпература
в. Залежність швидкості ферментативної реакції від рН середовища. Метод заснований на порівнянні швидкості гідролізу крохмалю, що визначається пробою з йодом, під дією ? - амілази слини при різних рН середовища. У результаті встановлюється оптимум рН дії ? - амілази.
Хід визначення. У п'ять пробірок відмірюють по 10 крапель розчинів фосфатно-цитратного буфера з наступними значеннями рН: 5,6, 6.4; 6,8; 7,2; 8,0. Додають в усі проби по 5 крапель розведеної в 10 разів слини і по 10 крапель розчину крохмалю і ставлять пробірки у водяну баню при 38? С. Через 1-2 хв відбирають по 1 краплі вмісту в інші пробірки і доливають по 1 краплі розчину йоду в йодиді калію. Відзначають час настання червоного фарбування (стадія освіти Ерітродекстріни) у кожній з п'яти проб. p align="justify"> Оформлення роботи. Дані оформити графічно, відкладаючи по осі абсцис значення рН середовища і по осі ординат - час (у хв), яке необхідно для гідролізу крохмалю до стадії Ерітродекстріни. Зробити висновок про оптимум рН дії ? - амілази слини.
Практичне значення роботи. Кінетичні властивості ферментів вивчаються для підбору оптимальних умов (концентрація субстрату, оптимум рН середовища і температури, іонний склад середовища), визначення активності ферментів в наукових і клінічних дослідженнях, а також при стандартизації ферментних препаратів. Невірно підібрані стандартні умови визначення конкретного ферменту призводять до помилок в діагностиці захворювань і контролі якості ферментних препаратів. br/>
4. Специфічність дії ферментів
Ферменти на відміну від синтетичних каталізаторів володіють високою специфічністю. Однак ступінь специфічності різних ензимів неоднакова, що дозволяє клітинам живих організмів пристосовуватися до змін середовища. p align="justify"> Робота 25. Демонстрація абсолютної субстратної специфічності уреази (карбамідамідогідролаза; КФ 3.5.1.5.) p align="justify"> Реактиви. Сечовина, 1%-ний розчин; тіосечовина, 1%-ний розчин; ацетамид, 1%-ний розчин; фенолфталеїн, 0,5%-ний спиртовий розчин; лакмусовий папір. p align="justify"> Обладнання. Аптечні ваги з важками; штатив із пробірками; очні піпетки; піпетки місткістю 1 мл. p align="justify"> Матеріал. Соєве борошно. p align="justify"> Метод заснований на визначенні аміаку, який утворюється під дією уреази соєвого борошна на сечовину:
уреаза
H2N? C? NH2 + H2O 2NH3? + CO2?
?
сечовина
Виділення аміаку виявляється за запахом і по зміні забарвлення фенолфталеїну і червоною лакмусовим папери. Порівнюють можливість гідролізу уреазою речовин, подібних за будовою з сечовиною:
H2N? C? NH2
?
Тіосечовина
CH3? C? NH2
?
ацетамид
Хід визначення. В одну пробірку поміщають 1 мл розчину сечовини, в другу - тіомочевіни, в третю - ацетаміду. p align="justify"> У кожну пробірку додають приблизно 10...
