ідношення ізоферментів (у% від загальної активності): ЛДГ1 - 32, ЛДГ2 - 47, ЛДГ3 - 12, ЛДГ4 - 5, ЛДГ5 - 4. При інфаркті міокарда в сироватці крові збільшується частка ЛДГ1 і ЛДГ2 (спектр зміщується в бік ізоферментів Н-типу), причому цей зсув визначається розмірами вогнища некрозу в серце. Загоєння супроводжується нормалізацією складу ізоферментів в сироватці крові. p align="justify"> При інфекційному гепатиті підвищена відносна відвідини ЛДГ4 і ЛДГ5. Якщо вона зберігається при клінічному одужанні, то це свідчить про незавершеність відновних процесів в печінці. p align="justify"> При ураженні підшлункової залози (панкреатит), легеневої тканини збільшується відносна активність ЛДГ3 в сироватці крові.
Робота 34. Визначення активності ? - глутамілтрансферази в сироватці крові
Реактиви. L-? - глутаміл-п-нітроаніліда; натрію хлорид; гліцил-гліцин *; субстратної-буферний розчин *; оцтова кислота льодяна, розчин 100 г/л; основний калібрувальний розчин п-нітроаніліда *.
Обладнання. Піпетки на 0,1, 1,0 і 5,0 мл, термостатіруются водяна баня; спектрофотометр або фотоелектроколориметр. p align="justify"> Матеріал. Сироватка крові. p align="justify"> Метод заснований на визначенні п-нітроаніліда, що утворюється з L-? - глутаміл-п-нітроаніліда при ферментативному перенесення L- ? - глутамілового залишку на гліцил-гліцин.
ГТФ
? - глутаміл-п-нітроаніліда + гліцил-гліцин
? - глутаміл-гліцілгліцід + п-нітроанілін
Хід визначення. В дослідну пробірку вносять 0,5 мл розчину субстрату і поміщають у водяну баню при температурі 37 В° С. Через 5 хвилин доливають 0,05 мл сироватки крові, вміст перемішують і інкубують точно 15 хвилин при температурі 37 В° С. Потім додають 3 мл розчину оцтової кислоти і перемішують. Контрольну пробу ставлять також як досвідчену, але сироватку додають після інкубації. Вимірюють на спектрофотометрі при довжині хвилі 410 нм або на ФЕК при довжині хвилі 400-500 нм (фіолетовий або синій світлофільтр) у кюветі з товщиною шару 10 мм проти контрольної проби. Забарвлення стабільна протягом декількох годин. p align="justify"> Розрахунок. Активність ферменту розраховують за калібрувальним графіком. p align="justify"> Оформлення роботи. За отриманими значеннями екстинкції знайти активність ферменту. На підставі цього зробити висновок про можливість зміни активності в досліджуваній сироватці і вказати на передбачувані причини. p align="justify"> Практичне значення роботи. У клініці використовується визначення активності ? - глутамілтрансферази в сироватці крові в основному при захворюваннях печінки і жовчних шляхів. У нормі активність становить для чоловіків 250-1767 нмоль/с В· л (15-106 МО), для жінок - 167-1100 нмоль/с В· л або 10-66 МО. Підвищення активності ферменту спостерігається при захворюваннях жовчних шляхів з явищами обтурації, при гепатитах, пухлинах і метастазах в печінку. Слід зазначити, що збільшення ? - глутамілтрансферази, як правило, зростає паралельно активності лужної фосфатази, але активність ? - глутамілтрансферази зростає раніше, залишається підвищеною більш тривалий час і відносне збільшення активності ферменту в кілька разів вище, ніж лужної фосфатази. Слід зазначити, що наркотики, седативні засоби, етанол, стимулюють активність ферменту, що використовується для діагностики алкогольно-токсичних захворювань печінки.
БІОХІМІЯ ТРАВЛЕННЯ
Травлення - це ферментативний гідроліз компонентів їжі. Для оцінки його використовуються методи дослідження активності ферментів та інших компонентів травних соків, що грають допоміжну роль у перетравленні поживних речовин, наприклад, соляна кислота, жовчні кислоти, іони кальцію і т.д. Відхилення в складі травних соків або поява у них компонентів, що не містяться у фізіологічних умовах, дають важливу інформацію про патології травлення. br/>
Робота 35. Дослідження кислотних компонентів шлункового соку
Реактиви. Гідроксид натрію, 0,1 М розчин; n-диметиламіноазобензолу, 0,5%-ний розчин в 36%-ном етанолі; фенолфталеїн, 0,5%-ний розчин в 70%-ном етанолі; фенол, 1%-ний розчин ; хлорид заліза (III), 1%-ний розчин.
Обладнання. Колби конічні місткістю 25 мл; мікробюретки; піпетки місткістю 1,5 і 10 мл; штатив із пробірками. p align="justify"...
