ого шару і його елююють сила підбираються дослідником експериментально, на кожен новий аналіз градієнт набирається знову. При наборі шарів у шприц і при їх подачі в колонку межі шарів розмиваються, це зменшує різкість сходинок градієнта і наближає його до градієнту з плавним профілем.
Одне з простих пристроїв для створення плавного градієнта зображено на рис. 1.4. Воно являє собою систему з двома сполученими посудинами конічної форми. Коли всі-крани відкриті, рівні в посудинах з розчинниками А і Б однакові. У міру витрачання розчинників в насос буде потрапляти суміш, що містить все більше розчинника Б і все менше-розчинника А. Міняючи форму судин, їх обсяг і подачу насоса, можна отримати градієнти різної форми.
Експонентні градієнти можна отримати з використанням пристосування, зробленого зі шприца (мал. 1.5). У шприц набирають певний обсяг слабкого розчинника А. Цей обсяг можна міняти, пересуваючи поршень шприца. Якщо включити подачу насоса, спочатку на колонку подаватиметься розчинник А, який потім буде по експоненціальним заколи змішуватися з більш сильним розчинником Б. Форму одержуваного градієнта можна міняти, підбираючи концентрації розчинів А і Б, місткість камери шприца і швидкість подачі розчинника насосом. Розраховане на високий тиск пристрій аналогічної конструкції може бути встановлено між насосом і інжектором. Воно також дозволяє отримати експонентний градієнт. Його перевага - можливість створення градієнта для мікроколонок з одним насосом, так як при цьому місткість насоса і підвідних трубок НЕ спотворює і не затримує початку градієнта. Недолік наведених пристроїв для формування градієнта - складність роботи з ними, низька відтворюваність, трудність підготовки багатьох сумішей розчинників, неможливість точного формування градієнта заданої форми, а цінність в тому, що в скрутних випадках за допомогою відносно нескладних саморобних пристроїв вдається вирішити завдання, принципово нерозв'язані ізократіческі. Пристрій для формування градієнта довільної форми діляться на дві великі групи: пристрої формування градієнта при низькому тиску (на вході в насос) і при високому тиску (на виході з двох або більше насосів). Обидві групи мають переваги і недоліки. Поява і розвиток нових пристосувань, методів роботи та варіантів ВЕРХ дозволило зменшити недоліки обох варіантів пристроїв формування градієнта і не дало остаточної переваги ні тому, ні іншому. Система формування градієнта при високому тиску зображена на рис. 1.6 (частина системи до інжектора). Як видно з малюнка, програматор 6 управляє кроковими двигунами насосів, що подають розчинники А і Б в постійно мінливому за обраним дослідником законом співвідношенні. Розчинники надходять в динамічний (іноді статичний, менш ефективний) змішувач з магнітною мішалкою, змішуються і подаються на інжектор і колонку. Як видно зі схеми, в порівнянні з ізократіческой система ускладнюється і, отже, коштує дорожче: додаються другий насос, програматор і змішувач, ряд електричних і гідравлічних ліній. Якщо буде потрібно градієнт з трьох або чотирьох розчинників, то для цієї схеми будуть необхідні додатково ще 1 або 2 насоса.
Рис. 1.5. Схема пристрою для створення градієнта низького тиску з використанням шприца: 1 - кран; 2 - шприц, 3 - поршень шприца, 4 - камера змішування; 5 - магнітна мішалка; 6 - до насоса; А і Б - слабкий і місцями розчинники
В
Рис. 1.6. Схема пристрою для створення градієнта високого тиску: 1 - до інжектора; 2 - змішувач; 3 - магнітна мішалка, 4 - насос для подачі розчинника А, 5 - насос для подачі розчинника Б; 6 - програматор; А і Б - слабкий і місцями розчинники
В
Рис. 1.7. Схема пристрою з клапанами для створення градієнта низького тиску: 1 - до інжектору; 2 - змішувач; 3 - магнітна мішалка, 4 - насос; 5,6 - клапани; 7 - Програматор; А і Б - слабкий і сильний розчинники
В
Схема формування градієнта при низькому тиску представлена ​​на рис. 1.7. Управління градієнтом також покладено на програматор, однак управляє вона не насосом, а двома електромагнітними клапанами, відкриваючи або закриваючи той чи інший за заданою програмі. Цим забезпечується надходження на вхід насоса 4 суміші розчинників А і Б в заданому співвідношенні. Суміш перемішується в клапанної системі, підвідних лініях, поршневих камерах і остаточно стає однорідною в змішувачі.
На перший погляд здається, що система ця простіше і краще попередньої: клапанна система варто, очевидно, дешевше додаткового насоса. Однак клапанна система, працююча при деякому розрідженні, через складну геометрії і в умовах змішування при цьому двох розчинників, що містять розчинені гази, при звичайної дегазації працює з постійними відмовами. Утворилися при змішуванні бульбашки налипають в клапанах і поршневих камерах, насос перестає подавати розчинник. Це особливо характерно для звернення-фазних та буферних розчинів, широко застосовуються в ВЕРХ. Складно не тільки провести глибоку дегазац...
