ни формальдегіду (4% -ні), глютаральдегіду (2-6% -ні), що фіксують суміші, що містять оцтову к-ту (рідина Карнуа), пикриновую к-ту (рідина Буена).
Один з кращих фіксаторів, використовуваний в електронномікроскопіч. дослідженнях, - р-р четирёхокісі осмію. При застосуванні повільно проникаючих фіксаторів (чотириокис осмію, глютаральдегид) товщина шматочків тканин повинна бути не більше 2 мм. Найкращі результати даётотносітельно тривала фіксація при t 2-4 ° С. Обизвествлённие тканини і структури після фіксації піддають декальцінаціі - обробці к-тами (азотної, соляної та ін.) Або електричні. струмом. По закінченні фіксації шматочки промивають у воді або спирті. Подальша обробка полягає в доданні шматочках однорідної щільної консистенції, що необхідно для отримання тонких зрізів. Це досягається або шляхом заморожування шматочків, або шляхом просочування - заливки їх різними застигає середовищами. При виготовленні зрізів на заморожують мікротому (рис. 1) заморожування об'єктів досягається або рідкою вуглекислотою, або за допомогою термоелектріч. охолоджуючого столика ТОС. У мікротому-криостате МК - 25 є камера з низькою темп-рій, в доурую укладений мікротом.
З середовищ для заливки частіше застосовують парафін і целлоидин. При заливанні в парафін відмиту від фіксатора тканину зневоднюють (через спирти зростаючої фортеці), проводять через проміжний розчинник (ксилол або хлороформ) і просочують парафіном при t 55-56 ° С, потім, швидко охолоджуючи шматочки, отримують парафінові блоки. При заливанні в целлоидин проміжним розчинником є ??спирт - ефір (1: 1). Для отримання зрізів з парафінових і целлоідінових блоків використовують санний мікротом. Фарбуванням зрізів досягають контрастування різних структур клітин і тканин, по-різному сприймають ті чи інші барвники.
Офарблюють зрізи після видалення з них парафіну (ксилолом), проводки їх через спирти понижающейся концентрації і промивання у воді. Способи забарвлюєтьсяия препаратів різноманітні. З основних барвників частіше використовують гематоксилін, кармін, сафранін, метиловий зелений, галлоціанін; з кислих - еозин, еритрозин, кислий фуксин, індигокармін та ін. Спец. барвники виділяють певні компоненти клітин і тканин, напр, слиз забарвлюється муцікарміном, ела. елементи - орсеїном та ін. Для приготування препаратів нервової тканини застосовують суправітально забарвлення метиленовим синім і різні методи імпрегнації - відновлення нервовими структурами металів, гл. обр. срібла. Після фарбування добре промиті препарати зневоднюють в спиртах висхідної фортеці (до 100%), просвітлюють в суміші карболової к-ти і ксилолу (1: 3), витримують в 2 працях ксилолу і потім укладають в середовище, яке забезпечує збереження структур об'єкта, його забарвлення і прозорість, застосовуючи для цього канадський або ялицевий бальзам, полістирол та ін.
У випадках, коли препарат не можна приводити в контакт з ксилолом, спиртом, використовують для укладення водорозчинні середовища (гліцерин, желатин або їх суміші). Для вивчення свіжого матеріалу (живих або переживають об'єктів) виготовляють тимчасові гістол. препарати, в яких брало об'єкт укладають в физиол. р-ри. Великі можливості для прижиттєвого дослідження клітин дає методкультури тканин.
1.5 Фарбування
Забарвлення гістологічних зрізів заснована на неоднаковому спорідненості тканинних елементів до певних барвникам. Ядра клітин більш здатні забарвлюватися основними, а цитоплазма - кислими фарбами. Відповідно до цього розрізняють основні, або ядерні, і кислі, або дифузні, фарби.
Найбільш часто у звичайній патологоанатомічної практиці застосовуються забарвлення зрізів гематоксилін-еозином по Ван-Гизону, Перлсу, Суданом III та ін.
Забарвлення гематоксилін-еозином . Забарвлюють зрізи в маленьких чашках Петрі або на шибках. Цей метод застосовується для фарбування зрізів, приготованих будь-яким способом. При цьому ядра клітин набувають фіолетово-синій або густо-синій колір, а цитоплазма і волокниста речовина - світло-синій або рожево-червоний. Жири та липоиди не фарбується. Еритроцити ссавців, оскільки вони ядер не містять, забарвлюються тільки еозином.
Забарвлення зрізів в чашках Петрі проводять таким чином.
. Зріз переносять препаровальной голкою з води в розчин гематоксиліном на 2-5 хв.
. Промивають у воді 2-5 хв.
. Занурюють на 10-20 с в 1% -ний розчин соляної кислоти на 70 ° спирті (якщо зріз сильно перефарбований гематоксиліном, його слід тримати в цьому розчині кілька довше).
. Промивають у чистій воді 5-10 хв.
. Промивають у слабощелочном розчині (в баночку з водо...
