ю додають 1-2 краплі нашатирного спирту) 10 хв.
. Промивають знову чистою водою протягом 10 - 15 хв. Якщо зріз після лужної води недостатньо промитий, він погано опитується еозином.
. Забарвлюють еозином протягом 3-5 хв.
. Промивають протягом 1-2 хв водою. 280
. Зневоднюють в спиртах висхідної фортеці - 75, 90, 100 °. Якщо зріз перефарбований еозином, його слід трохи довше тримати в 75 ° спирті.
. Просвітлюють в карболксілоле.
. За допомогою шпателя і голки зріз переносять на предметне скло.
. Висушують фільтрувальним папером.
. На зріз наносять краплю канадського або пихтового бальзаму і накривають покривним склом.
Забарвлення за Ван-Гизону. У зрізах, забарвлених по Ван-Гизону, сполучна тканина фарбується в яскраво-червоний, решта тканини - в жовтий або сірувато-жовтий колір. Ядра забарвлюються в чорний або темно-фіолетовий колір.
Фарбування роблять наступним чином.
. Зрізи інтенсивно забарвлюють гематоксиліном (краще гематоксилін Вейгерта) і споліскують у воді.
. Відразу переносять у пикрофуксином на 3-5 хв (суміш насиченого водного розчину пікринової кислоти - 150,0 і насиченого водного розчину кислого фуксину - 3,0-5,0).
. Швидко промивають у воді (вода витягує з зрізу фуксин).
. Зневоднюють 95 ° спиртом 1-2 хв.
. Просвітлюють в карболксілоле і укладають у смерековий бальзам, як при фарбуванні гематоксилін-еозином.
Забарвлення Суданом III . Судан III - нейтральна азокраска, розчинна в спирті, ацетоні і жирах, не розчинний у воді. Забарвлення Суданом III виробляють для визначення в зрізах жирів і ліпідів. Техніка забарвлення наступна.
. Заморожені зрізи переносять ізводи на 0,5- 1 хв у 50 ° спирт.
. Зрізи поміщають в свежефільтрованний розчин Судану на 10-20 хв.
. Споліскують 50 ° спиртом протягом 0,5-1 хв.
. Ретельно промивають водою протягом 10 - 15 хв.
. Зрізи підфарбовують галуновим гематоксиліном Ерліха або Бемера.
. Промивають водою протягом 3-5 хв. Перефарбовані в гематоксиліном зрізи диференціюють в 1% -ному водному розчині соляної кислоти, споліскують підлуженою водою, потім чистою водою.
. Укладають в гліцерин або гліцерин-желатину.
. Накривають покривним склом.
1.6 Контроль якості
Гістологічний препарат будь-якої форми повинен відповідати наступним вимогам:
1. Зберігати прижиттєве стан структур;
. Бути досить тонким і прозорим. Для вивчення його під мікроскопом в прохідному світлі.
. Бути контрастним, тобто досліджувані структури повинні під мікроскопом чітко визначатися;
. Препарати для світлової мікроскопії повинні довго зберігатися і використовуватися для повторного вивчення.
Ці вимоги досягаються при якісному приготуванні препарату. Основним методом дослідження біологічних об'єктів, використовуваним в гістології є мікроскопірованіе (тобто вивчення препаратів під мікроскопом).
2. Можливі похибки
Для того що б отримати хороші гістологічні зрізи, необхідно вміти своєчасно розпізнати і усунути причину, яка погіршує якість зрізу.
а) Зріз кришиться.
Причини:
1) твердий парафін
) низька температура навколишнього середовища
) повільне охолодження парафіну при заливці
) великий кут нахилу ножа
Усунення:
) залити матеріал у більш м'який парафін після попереднього розтоплення блоку в термостаті
) дихати на поверхню блоку (зігрівання) перед кожним рухом ножа або пристосувати ел. плиту поряд з мікротома
) змінити кут нахилу ножа.
б) Залитий матеріал в процесі різання випадає з навколишнього маси парафіну.
Причини:
) при перенесенні шматочка в формочку для заливки відбулося його охолодження.
Усунення:
) необхідно блок розтопити в термостаті і залити заново, суворо дотримуючись правил заливки, після попереднього розтоплення матеріал переносять у проміжні зрізи (для видалення спирту), потім знову...
