олокон фібрину. p align="justify"> б. Демонстрація гідролізубілка під дією трипсину. Основа методу та ж, що і при вивченні дії пепсину. p align="justify"> Хід визначення. Беруть три пробірки і наливають в одну з них 2 мл розчину карбонату натрію, в іншу - дистильованої води і в третю - розчин соляної кислоти (0,1 моль/л). У першу і третю пробірки додають по 1 мл розчину трипсину (або панкреатину) і в другу - 1 мл попередньо прокип'яченої трипсину (або панкреатину). Перемішують проби струшуванням. p align="justify"> У кожну пробірку поміщають по однаковому шматочку фібрину і ставлять їх у термостат при 38? С на 10 хв, стежачи за розчиненням фібрину. Відзначають зміни, які з фібриновими волокнами в ході інкубації. p align="justify"> Оформлення роботи. Результати дослідів оформити у вигляді таблиці. br/>
№ пробиПрепарат ферментаСубстратУсловія опитаІзмененія фібрінарН средикіпяченіе
У висновках вказати оптимальні умови для дії вивчених протеолітичних ферментів і практичне значення досліджень.
Практичне значення роботи. Переварювання білка в шлунково-кишковому тракті залежить не тільки від кількості утворюються протеолітичних ферментів, але і від умов середовища, в яких вони діють. При гіпохлоргідрії або анацидном гастриті є несприятливі умови (нестача соляної кислоти) для гідролізу харчового білка пепсином. Застосування лужних розчинів (питна сода) за даних патологічних станах призводить до руйнування виділяється клітинами шлунка пепсину. Навпаки, гіперхлоргідрія обумовлює більш повільну нейтралізацію кислого шлункового вмісту, що надходить в кишечник, і як наслідок цього менш ефективну активацію проферментов і переварює їх дії на білки і пептиди їжі. br/>
Робота 38. Вивчення динаміки гідролізу тріацілгліцерінов під дією панкреатичної ліпази
Основну частину харчових ліпідів складають тріацілгліцеріни, тому в перетравленні жиру найбільш важливі умови для дії панкреатичної ліпази (триацилгліцеролів-ацілгідролаза; КФ 3.1.1.3). Цей фермент гідролізує тільки емульгований жир в слаболужною середовищі. Активатором ферменту служать жовчні кислоти. Ліпаза гідролізує переважно кінцеві ацилов молекули тріацілгліцеріна. Утворений 2-моноацілгліцерінов розщеплюється карбоксиестераз. p align="justify"> В якості субстрату для вивчення активності ліпази використовують приготовлену жирову емульсію або молоко, в якому ліпіди знаходяться в емульгованому стані.
Реактиви. Коров'яче молоко; жовч; гідроксид натрію, 0,1 М розчин; фенолфталеїн, 0,5%-ний розчин в 76%-ном етанолі. p align="justify"> Обладнання. Колби місткістю 100 мл для титрування; мікробюретки; водяна баня з лабораторним термометром. p align="justify"> Матеріал. Панкреатин, свіжоприготований +5%-ний розчин на 1%-ном розчині бікарбонату натрію (рН? 8,0). p align="justify"> Метод заснований на титриметричному визначенні за допомогою гідроксиду натрію жирних кислот, які звільняються з тріацілгліцерінов молока в процесі їх гідролізу панкреатичної ліпазою у присутності і під час відсутності жовчі. Реакція протікає за рівнянням
В
Кількість які виникають жирних кислот визначається титруванням розчином гідроксиду натрію з індикатором фенолфталеїном.
Хід визначення. У три колби відміряють циліндром по 25 мл коров'ячого молока і додають у першу 2 мл дистильованої води, в другу і третю по 2 мл розчину панкреатину. Крім того, в третю колбу додають 5 крапель жовчі (1 мл). p align="justify"> Вміст колб перемішують і відразу відбирають по 5 мл в інші колби для титрування (визначають вихідний рівень вільних жирних кислот).
Колби з залишилася сумішшю поміщають у водяну баню при 37 Вє С і через кожні 15 хв беруть по 5 мл їх вмісту, переносять у колби для титрування проб.
До відібраних 5 мл інкубаційної суміші в колби додають по 10 мл дистильованої води і по 2 краплі розчину фенолфталеїну. Відтитровують їх вміст 0,1 М розчином гідроксиду натрію до слабо-рожевого забарвлення рідині. Відзначають обсяг гідроксиду натрію, який пішов на титрування всіх проб. p align="justify"> Оформлення роботи. Результати оформити графічно: по осі ординат відкласти об'єм розчину гідроксиду натрію, що пішов на титрування всіх проб, а по осі абсцис - час. За отриманими на графіку трьом кривим (1 - без ліпази; 2 - з ліпазою, 3 - ліпаза і жовч) зробити висновок про відносну швидкості гідролізу тріацілгліцерінов під дією ліпази і ролі жовчі в цьому процесі. p align="justify"> Практичне значення роботи. При захворюваннях підшлункової залози, в якій утворюється ліпаза, може порушуватися переварювання жирів, і вони виводяться в незмінному вигляді. Однак найчастіше спостерігається порушення перетравлення жирів при патології печінки і жовчовивідних шляхів, коли жовч або не виробляється, або не надходить у кишечник чинності пере...
