шкод в жовчовивідних шляхах. Оскільки жовчні кислоти є активаторами ліпази, емульгаторами жирів, а також беруть участь у процесі всмоктування жирних кислот, те за їх відсутності різко порушується процес перетравлення ліпідів з виділенням їх у великій кількості з фекаліями (стеаторея). Визначення активності ліпази застосовується в клініці після взяття кишкового соку за допомогою зонда для встановлення причини патології перетравлення ліпідів. У фармації метод дослідження активності ліпази необхідний для контролю якості лікарських препаратів (панкреатин, фестал, панзинорм та ін), що містять цей фермент. p align="justify"> ЕНЕРГЕТИЧНИЙ ОБМІН (біоенергетика)
Існує два основних типи енергетики живих організмів - фототрофні і хемотрофних. Першим володіють рослини і фотосинтезуючі мікроорганізми, які перетворюють енергію сонячного світла в енергію фосфатних зв'язків АТФ, а другим - клітини організмів, зокрема людини і тварин, що використовують для утворення АТФ енергію окислювально-відновних реакцій. p align="justify"> Основна частина енергії в тканинах людини і тварин утворюється аеробним шляхом в ході окисного фосфорилювання в мітохондріях. Анаеробне утворення енергії відбувається в процесі гліколізу (глікогенолізу). Однак він відіграє допоміжну роль. p align="justify"> Спрощено аеробне утворення енергії можна представити наступною схемою
В
Ефективність цього процесу залежить від активності дегідрогеназну ланки (тобто від наявності субстратів окислення S В· H2 і активності дегідрогеназ), яке забезпечує надходження водню, пов'язаного з НАД або ФАД, на дихальну ланцюг мітохондрій, а також від сполучення дихання і фосфорилювання (див. підручник с.204-214).
1. Дослідження процесів біологічного окислення в тварин тканинах
Робота 39. Виявлення цитохромоксидази в м'язовій тканині
Цитохромоксидази, або комплекс цитохромів а + а3, є заключним компонентом дихального ланцюга мітохондрій тварин і рослинних клітин. Цей фермент переносить електрони на кисень. Він міцно пов'язаний з внутрішньою мембраною мітохондрій і витягується тільки при її руйнуванні. Цитохромоксидази може окисляти ряд синтетичних субстратів, наприклад, ? - нафтол та N, N ? - диметил-n-фенілендіамін (реактив НАДІ, названий по перших складах обох сполук). Реактив НАДІ використовується для виявлення цього ферменту в тканинах.
Реактиви. Реактив В«НАДІВ» *. p align="justify"> Обладнання. Ступка з товкачиком; воронка для фільтрування; фільтрувальна папір, ножиці, скляні палички; марля або бинт; піпетки місткістю 1 мл; мірний циліндр; водяна баня; аптечні терези з важками. p align="justify"> Матеріал. М'язова тканина (свіжа) забитої тварини. p align="justify"> Метод заснований на утворенні в ході реакції окислення диметил-n-фенілендіамін та ? - нафтола цитохромоксидазой індофенолового блакитного, інтенсивність синього забарвлення якого пропорційна активності ферменту.
Хід визначення. 5 г м'язової тканини подрібнюють ножицями і ретельно розтирають у ступці, додаючи порціями 20 мл дистильованої води. М'язову кашку фільтрують через подвійний шар марлі і багаторазово промивають дистильованою водою до безбарвної забарвлення промивних вод. p align="justify"> Безбарвну масу, яка містить цитохромоксидазу, комплекс цитохромів і деякі дегідрогенази, віджимають між аркушами фільтрувального паперу. Отриманий залишок кашки ділять на три частини: одну переносять в пробірку, а дві інші залишають на фільтрувальної папері. p align="justify"> До каші в пробірці підливають 1 мл дистильованої води і кип'ятять вміст на водяній бані 1 хв. Пробірку охолоджують, обережно зливають рідину і м'язову кашку за допомогою скляної палички переносять на інший аркуш фільтрувального паперу. p align="justify"> На першу порцію м'язової кашки (кип'ячену) і другу (некип'ячену) наносять за 2-3 краплі реактиву НАДІ, третю (теж некип'ячену) - спочатку змочують розчином азиду натрію, а через 3 хв на неї наносять 2 -3 краплі реактиву НАДІ. Порівнюють характерні забарвлення проб. p align="justify"> Оформлення роботи. Результати оформити у вигляді таблиці. br/>
№ пробыМатериалФерментСубстратыУсловия опитаОкраска пробитемпературная обработкаінгібітори
Практичне значення роботи. Цитохромоксидази як гемсодержащіх білок дуже чутлива до дії ціанідів, сульфідів, азидів і інших речовин, що взаємодіють з залізом гема. При отруєнні цими сполуками відбувається пригнічення цитохромоксидази і розвивається гістотоксіческая гіпоксія, тобто кисневе голодування тканин, пов'язане з неможливістю використовувати кисень як акцептор електронів і протоні...
