p align="justify"> Для постановки стандартної проби замість крові беруть 0,1 мл розведеного в 5 разів стандартного розчину глюкози, додають 0,9 мл розчину трихлороцтової кислоти і з 0,5 мл отриманої суміші проводять реакцію з о-толуїдиновим реактивом .
Фотометрують дослідну і стандартні проби на ФЕК при 590-650 нм (червоний світлофори льтр) в кюветі з товщиною шару 0,5 см порівняно з дистильованою водою.
Розрахунок. Вміст глюкози в крові х (моль/л) розраховують за формулою
Еоп Сст
х = -----,
Їсть
де Еоп - екстинкція досвіду,
Їсть - екстинкція стандарту;
Сст - концентрація глюкози в стандартній пробі, рівна 5,55 ммоль/л.
Оформлення роботи. Розрахувати концентрацію глюкози в крові обстежуваного і зробити висновок про причини можливих змін її рівня. p align="justify"> Практичне значення роботи. Методи, які застосовуються для визначення глюкози, не завжди дають справжній зміст її в крові, тому існують поняття - В«справжняВ» глюкоза і цукор крові. Останній показник включає всю суму відновлюють вуглеводів і деякі редуцирующие речовини невуглеводної природи (глутатіон, креатин, сечова кислота). Тому вміст цукру в крові вище, ніж показник істинної глюкози. p align="justify"> Серед методів, що дозволяють визначити концентрацію істинної глюкози в біологічному матеріалі, слід зазначити про-толуїдиновий і глюкозооксидазний.
У нормі вміст цукру в крові становить 0,8-1,2 г/л, а глюкози - 2,8-4,0 ммоль/л. Збільшення рівня цукру в крові (гіперглікемія) спостерігається при цукровому діабеті, при надлишку в організмі глюкокортикоїдів - гормонів кори надниркових залоз, при стресових станах, при вживанні з їжею великої кількості вуглеводів і т.д. Низький вміст цукру в крові (гіпоглікемія) має місце при голодуванні, порушенні всмоктування глюкози в тонкому кишечнику (малосорбція), при надлишку інсуліну в організмі (гиперинсулинизм) і т.д.
Робота 47. Кількісне визначення вмісту глюкози в крові глюкозооксидазним методом
Реактиви. 5%-ний розчин трихлороцтової кислоти; натрій фосфат двозаміщений, 0,25 моль/л *; розчин глюкозооксидази *; фенолфталін 0,5%; робочий реактив *. p align="justify"> Обладнання. Штатив із пробірками; піпетки місткістю 0,1, 1,0, 2,0 мл; центрифуга з Центрифужна вагами; ФЕК. p align="justify"> Матеріал. Кров, взята з пальця. p align="justify"> Метод заснований на здатності глюкозооксидази при певному оптимумі рН дії каталізувати розпад глюкози з утворенням перекису водню. Утвориться перекис водню в присутності іонів міді окисляє фенолфталін до фенолфталеїну, який в нейтральній області безбарвний, а в лужному області пофарбований у червоний колір. p align="justify"> Хід визначення. 0,03 мл крові виливають в 1,5 мл 5% розчину трихлороцтової кислоти, перемішують і центрифугують. До 1 мл надосадової рідини додають 2 мл 0,25 моль/л фосфату натрію і 2 краплі (приблизно 0,1 мл) розчину глюкозооксидази. Перемішують і залишають стояти при кімнатній температурі на 1 годину, потім додають 2 мл робочого реактиву і через 30 хв фотометрують в кюветі на 10 мм при довжині хвилі 530 нм (зелений світлофільтр). p align="justify"> Одночасно ставлять контрольну пробу, в яку беруть 1 мл 5% розчину трихлороцтової кислоти і далі проводять як і дослідну пробу.
Розрахунок. Розрахунок проводять за калібрувальним графіком. p align="justify"> Оформлення роботи. За екстинкції розраховують вміст глюкози в крові, порівнюють її зміст з нормою і роблять висновок про можливі відхилення. p align="justify"> Практичне значення роботи. (Див. визначення вмісту глюкози в крові орто-толуїдиновим методом). br/>
Робота 48. Визначення вмісту молочної кислоти в крові по Баркеру і Саммерсон
Реактиви. Трихлороцтової кислота, 20%-ний розчин; сульфат міді (II), 20%-вий і 4%-ний розчини; оксид кальцію, порошок, навішування 0,5 г; сірчана кислота, конц.; N-гідроксідіфеніл, свіжоприготований лужний розчин (50 мг n-гідроксідіфеніла розчиняють в 3 мл 3%-ного розчину гідроксиду натрію).
Обладнання. Водяна баня з лабораторним термометром; штатив із пробірками; піпетки на 0,1 і 1 мл; скляні палички; центрифуга з Центрифужна вагами; ФЕК. p align="justify"> Матеріал. Кров, взята з пальця. p align="justify"> Метод заснований на здатності молочної кислоти при нагріванні з концентрованою сірчаною кислотою переходити в ацетальдегід, який дає з n-гідроксідіфенілом характерну фіолетове забарвлення, інтенсивність якої пропорційна концентрації молочної кислоти:
В В
Хід визначення. У центрифужну пробірку відмірюють 0,5 мл дистильованої води і вносять у неї 0,1 мл крові, взятої мікропіпеткою з пальця обстежуваного. Мікропіпет...
