ку промивають тією ж водою. p> До вмісту пробірки додають 1 мл розчину оцтової кислоти і поміщають її на 10 хв в лід (для кращого осадження білків), після чого центрифугують 5 хв при 3000 об/хв.
Надосадову рідину зливають в чисту центрифужну пробірку, додають 0,5 мл 20%-ного розчину сульфату міді і 0,5 г порошку оксиду кальцію і ретельно перемішують скляною паличкою. З'являється блакитне забарвлення (якщо фарбування зеленувате, то проба подальшої обробці не піддається). Суміш залишають стояти на 30 хв, періодично помішуючи скляною паличкою. Потім її центрифугують +5 хв при 100 об/хв. p align="justify"> Надосадову рідину зливають до чисту пробірку, доливають 1 краплю 4%-ного сульфату міді і обережно нашаровуються 3 мл концентрованої сірчаної кислоти, зануривши при цьому пробірку в лід і безперервно помішуючи вміст скляною паличкою. Після цього пробірку поміщають в киплячу водяну баню на 5 хв і потім охолоджують її у водяній бані до 20? С.
До охолодженої суміші доливають 1 краплю (0,05 мл лужного розчину n-гідроксідіфеніла і ставлять пробірку у водяну баню при 30? С на 30 хв, час від часу збовтуючи вміст. У пробірці за цей час розвивається блакитне забарвлення. Пробірку поміщають на 90 с (точно!) в бурхливо киплячу водяну баню. За цей час блакитне забарвлення переходить у фіолетове. Потім суміш охолоджують і фотометрують на ФЕК при 540 нм (світлофільтр зелений) в кюветі з товщиною шару 1,0 см проти води.
Розрахунок. Вміст молочної кислоти х (ммоль/л) розраховують за формулою
С1000
х = -----,
0,1? 1000
де с - кількість молочної кислоти в пробі, знайдена за калібрувальним графіком, ммоль;
, 1 - об'єм крові, взятий на дослідження, мл;
в чисельнику - коефіцієнт перерахунку на 1 л крові;
в знаменнику - коефіцієнт переведення мікромолей в мілімолей.
Оформлення роботи. Розрахувати вміст молочної кислоти в крові обстежуваного. У висновку вказати на можливі зрушення концентрації молочної кислоти і їх причини. p align="justify"> Практичне значення роботи. У нормі вміст молочної кислоти в крові становить 0,50-2,0 ммоль/л. Збільшення її змісту може спостерігатися при посиленою м'язової роботі, при захворюваннях, що супроводжуються розвитком гіпоксії (недостатність серцевої діяльності, хронічні бронхіти, анемія тощо). br/>
Робота 49. Визначення вмісту піровиноградної кислоти в крові по Фрідеманн і Хаугеном
Реактиви. Трихлороцтової кислота, 5%-ний розчин; 2,4-дінітрофенілгідразін (2,4-ДНФГ), 0,1%-ний розчин в 2 М розчині соляної кислоти; толуол; карбонат натрію, 10%-ний розчин; гідроксид натрію, 1,5 М розчин.
Обладнання. Пеніцилінові флакончики з поліетиленовими пробками; штатив із пробірками; піпетки місткістю 1 і 5 мл; бюретка місткістю 25 мл; піпетка з гумовою грушею; центрифуга з Центрифужна вагами; ФЕК. p align="justify"> Матеріал. Кров. p align="justify"> Принцип методу див. роботу 31.
Хід визначення. У центрифужну пробірку вносять 1 мл крові, доливають 4 мл розчину трихлороцтової кислоти, перемішують струшуванням і центрифугують 10 хв при 3000 об/хв. p align="justify"> У пеніциліновий флакон відбирають 1 мл центрифугата, додають 2 мл води і 1 мл розчину 2,4-ДНФГ, перемішують струшуванням, закривають корком і ставлять у темне місце на 20 хв.
До вмісту флакона додають 5 мл толуолу, закривають флакон корком і струшують 3 хв. Після розшарування фаз відсмоктують піпеткою з гумовою грушею нижній шар і відкидають його. p align="justify"> До залишився у флаконі шару толуолу доливають 4 мл розчину карбонату натрію, закривають флакон корком і струшують 3 хв. Після розшарування рідин відбирають з нижнього шару 3 мл у пробірку і додають в неї 3 мл розчину гідроксиду натрію (з'являється червоно-буре фарбування). p align="justify"> Через 5 хв фотометрують пробу на ФЕК при 415 нм (світлофільтр синій) в кюветі з товщиною шару 1 см проти води.
Розрахунок. Зміст піровиноградної кислоти х (ммоль/л) розраховують за формулою
з 1000? 3
х = ------,
4? 1000
де с - кількість піровиноградної кислоти в пробі, знайдена за калібрувальним графіком, мкмоль;
в чисельнику - коефіцієнт перерахунку на літр крові;
в знаменнику - коефіцієнт перерахунку мкмоль в ммоль;
- обсяг доданого розчину карбонату натрію, мл;
- об'єм розчину карбонату натрію, відібраного для проведення реакції, мл.
Оформлення роботи. За отриманого значення екстинкції розрахувати вміст пірови...
