і та повного усунення вільного флуорохромами сироватку адсорбують порошком, приготованим з печінки білих мишей або тварин тих видів, матеріал від яких передбачається досліджувати.
Приготування порошку з печінки. Печінка здорових тварин звільняють від жовчного міхура, багаторазово промивають 0,15 М розчином хлористого натрію і подрібнюють у гомогенизаторе. Потім, Центріфугіруем гомогенат, по черзі відмивають ацетоном і 0,15 М розчином хлористого натрію і промивають розчином хлористого натрію, висушують і подрібнюють в тонкий порошок. Приготований порошок зберігають при низькій температурі в ексикаторі або запаяним в ампули, у вакуумі. Для адсорбування флуоресціюючої сироватки на 1 мл беруть 80-100 мг порошку. Суміш сироватки і порошку змішують при температурі 18-22 градуси протягом години, а потім центрифугують і фільтрують через мембранний фільтр № 3-5. При дослідженні інфікованих культур клітин тканин адсорбцію ведуть відмитим нормальними клітинами цієї тканини, попередньо висушеними і подрібненими. p align="justify"> Повноту очищення сироватки від незв'язаного барвника перевіряють методом електрофорезу на папері або в агарових тілі. Присутність неспецифічних антитіл виявляють люмінесцентної мікроскопією контрольних препаратів, тобто препаратів, що не містять антигенів, гомологічних сироватці. Флуоресціюючі сироватки або їх глобуліни тривалий час зберігають специфічну активність у лиофилизированном стані. p align="justify"> Методи роботи з флуоресціюючими антитілами
Приготування і фіксація препаратів. Залежно від мети в якості об'єктів дослідження можуть бути використані різні препарати: мазки-відбитки, зіскрібки, гістологічні зрізи і т.п.
Предметні скла для препаратів повинні бути чистими, знежиреними і не мати подряпин. Мазки-відбитки і препарати зіскрібків готують звичайними способами. Гістологічні зрізи роблять на заморожували мікротому або криостате. p align="justify"> Перед фарбуванням препарати з культури клітин відмивають від поживного середовища 0,15 М розчином хлористого натрію у фосфатному буфері 0,01 М, рН 7,2-7,4 і висушують. Вибирають такий фіксатор препаратів, який не веде до розчинення антигенів вірусів і не порушує їх імунологічної специфічності. Найчастіше застосовують етиловий або метиловий спирт, а ще краще - чистий ацетон, охолоджений до -15 градусів. Фіксують препарати 10-15 хвилин. У такому стані препарати можуть зберігатися досить тривалий час. p align="justify"> Фарбування препаратів флуоресціюючими антитілами. При прямому методі на фіксований і висушений препарат наносять 1-2 краплі цільного або розведеного кон'югату. Ступінь розведення підбирають для кожної серії сироватки індивідуально, залежно від характеру досліджуваного матеріалу, ступеня і способу очищення кон'югату, вмісту в ньому білка та інших умов. Тривалість фарбування, як і розведення сироватки, встановлюють дослідним шляхом. Зазвичай обробку ведуть...
