при кімнатній температурі або в термостаті, у вологій камері, для чого препарати поміщають у закриті чашки Петрі з вкладеними в них вологими тампонами вати. p align="justify"> Тривалість контакту кон'югату з препаратом варіює від 1 до 60 хвилин. Пофарбований препарати відмивають 10-15 хвилин 0,15 М розчином хлористого натрію у фосфатному буфері 0,01 М.
При непрямому методі препарат спочатку обробляють у вологій камері 3-5 хвилин специфічної нефлуоресцірующіх сироваткою, розведеною у кілька разів, залежно від її активності, а потім ретельно відмивають злегка підсушений препарат фарбують 15-20 хвилин флуоресцирующимантиглобулином. Антіглобулін отримують від тварини, імунізованих сироваткою того виду тварини, яке було продуцентом специфічної сироватки. Антивидові сироватки для даних цілей отримують більш активними, якщо імунізацію проводять специфічною сироваткою, якою користуються у першому етапі. У модифікації непрямого методу з фарбуванням комплементу на забарвлюваний препарат наносять краплю суміші комплементу і сироватки, імунної до досліджуваному антигену сироватки. Перед змішуванням комплемент - свіжу сироватку морської свинки розводять 1:10 фізіологічним розчином, а імунну сироватку інактивують нагріванням при 56 градусах. Приготований препарат укладають у вологу камеру і поміщають в термостат (37 градусів) на 30 хвилин. Потім 10-15 хвилин його промивають буферним розчином і підсушують, обережно видаляючи надлишок рідини фільтрувальної папером. Далі препарат фарбують флуоресціюючої сироваткою проти глобулінів морської свинки, розведеною 1:2 буферним розчином. p align="justify"> Час контакту сироватки з препаратом може тривати 5-30 хвилин.
флуоресціюючих сироватку з препарату видаляють промиванням буферним розчином протягом 10-15 хвилин.
Для микроскопирования препарати містять в суміш з 9 частин гліцерину і 1 частини фосфатного буфера рН 7,0. Для запобігання випаровування рідини краю покривного скла заливають парафіном. p align="justify"> Люмінесцентна мікроскопія забарвлених препаратів. Для люмінесцентної мікроскопії потрібні люмінесцентні освітлювачі, мікроскопи та світлофільтри. При даному виді мікроскопії препаратів, оброблених флуоресціюючими антитілами, часто користуються відбитими променями, які падають на об'єкт зверху, через об'єктив мікроскопа. Світло концентрується в дуже вузький і яскравий пучок, що висвітлює тільки ділянку поля зору. p align="justify"> Чітке зображення в полі зору люмінесцентного мікроскопа можна отримати тільки при правильному підборі світлофільтрів. До люмінесцентної мікроскопії додається 2 види світлофільтрів:
Первинні світлофільтри, збуджуючі люмінесценцію досліджуваних об'єктів, і окулярние, або В«замикаючіВ», призначені для пропускання світла люмінесценції та гасіння світла, що пройшло через первинні фільтри. Замикаючі фільтри надягають на окуляр мікроскопа при використанні люмі...
