іж в умовах незбалансованого зростання. У результаті високий рівень КоА інгібує активність ? - кетотіолази і в кінцевому підсумку, - синтез полімеру. Про регуляторної ролі ЦТК в напрямку потоків ацетил КоА в клітці свідчать дані, отримані на мутанте R.eutropha, позбавленого ізоцітратдегідрогеназной активності, який синтезує зі значно більшою швидкістю, ніж дикий штам. Разом з тим, показано, що активність перших двох ферментів ЦТК інгібується підвищеними концентраціями відновлених нікотінамідних нуклеотидів при незбалансованому зростанні. Таким чином, синтез полімеру, наприклад, в R.eutropha починається, коли ингибируются активності ферментів ЦТК (цітратсінази і ізоцитратдегідрогенази). Це призводить до збільшення внутрішньоклітинної концентрації ацетил-КоА, відновлених піридиннуклеотидів, зниження концентрації вільного коферменту А і окислених форм нуклеотидів. Схожий контроль ферментативної активності на рівні метаболітів був підтверджений на рекомбінантному штамі E.coli, трансформованому генами синтезу полімеру з R.eutropha.
На перших порах в R.eutropha було виявлено дві ? - кетотіолази. Рівень ферментативної активності кетотіолази в клітинах, вирощених в умовах лімітування зростання азотом або вуглецем, однаковий (0,20 і 0,27 U/мг білка, відповідно). Це дозволило авторам зробити висновок про конститутивний природі ферменту. Було встановлено, що дві кетотіолази відрізняються субстратної специфічністю. Так ? - кетотіолази А активна з ацетоацетил-КоА і 3-кетопентаноіл-КоА і є головним претендентом на участь у синтезі субстратів для ПГА. Субстратна специфічність ? - кетотіолази У виявилася більш широкої, фермент активний з довголанцюгових 3-кетоацільнимі похідними КоА від 4 до 10 атомів вуглецю. Було висловлено припущення, що ця кетотіолази є ферментом ? - окислення жирних кислот. Участь кетотіолази В у синтезі субстратів для утворення полімеру було підтверджено на рекомбінантних штамах Escherichia coli, дефектним за генами, відповідальним за деградацію жирних кислот і транспорт пропіонату, і містить оперон синтезу полімеру з A.eutrophus без гена кетотіолази (phaA). Надалі з R.eutropha були клоновані три послідовності, що кодують три ? - кетотіолази. Було встановлено, що ? - кетотіолази, кодована phaA геном, є ? - кетотіолази А і високоактивними з ацетоацетил-КоА. Друга ? - кетотіолази, що є продуктом bktB гена, відповідає переважно за синтез кетовалеріл-КоА і меншою...
