мірою - кетогексаноіл-КоА, а також, можливо, відповідає ? - кетотіолази В і бере участь у ? - окисленні коротко-і среднецепочечних жирних кислот. Функція третьої кетотіолази поки до кінця не з'ясована, але вона також активна з ацетоацетил-КоА як субстратом. Участь ? - кетотіолази В у синтезі полімеру було підтверджено в роботі. Автори встановила, що в умовах блокування ? - окислення жирних кислот у клітинах R.eutropha створюється пул среднецепочечних 3-гидроксикислот, службовців субстратом для синтезу ПГА. У результаті клітини накопичують гетерополімерние ПГА з включенням гідроксігексаноата до 7-10 мол.%.
Відомо, що пул ацетил-КоА (основного субстрату ? - кетотіолази) формується в клітинах R.eutropha в результаті катаболізму жирних кислот, амінокислот і вуглеводів. В умовах дефіциту азоту в середовищі в клітинах синтезується гомополімер оксимасляної кислоти. Синтез гетерополімерние ПГА зазвичай спостерігається при додаванні в середу жирних кислот або інших альтернативних ко-субстратів. Однак, мутант A.eutrophus із зміненим анаболізмом розгалужених амінокислот синтезував багатокомпонентні ПГА без добавок у культуральне середовище жирних кислот. Це пояснюється тим, що при катаболізмі валіну, треоніну і ізолейцину утворюється пропіоніл-КоА, що вступає в реакцію конденсації з ацетил-КоА, при цьому в кетотіолазной реакції утворюється 3-кетовалерат-КоА, який відновлюється далі до відповідної гідроксикислоти - субстрату ПГА-синтази.
Таким чином, в R.eutropha виявлено, принаймні, три кетотіолази, що відрізняється своєю специфічністю до субстратів. Продукти всіх кетотіолази використовуються в синтезі ПГА. Фермент відіграє провідну роль у клітинному метаболізмі, так як саме він, реагуючи на рівень ацетил-КоА і КоА в клітці, включає синтез запасного матеріалу - ПГА. p align="justify"> На другому етапі синтезу ПГА відбувається відновлення продуктів, отриманих в кетотіолазной реакції, до гидроксикислот. Це реакція каталізується другим ферментом биосинтетического шляху ПГА - ацетоацетил-КоА-редуктазою. У R.eutropha виявлено дві редуктази - НАДН - і НАДФН-залежні. У синтезі полімеру бере участь тільки НАДФН-залежна ацетоацетил-КоА редуктаза. Фермент відрізняється високою специфічністю до довжини ланцюга кетоацил похідних КоА і активний з 3-гідроксіаціл-КоА з довжиною ланцюга від 4 до 6 атомів вуглецю. Висока специфічність редуктази з R.eutropha до довжини ланцюга субстрату була підтверджена в пізніших роботах з рекомбінантними штамами Е. coli. Критичним фактором, що визначає активність ферменту, є співвідношення НАДФН/НАДФ. При високих значеннях цього співвідношення активність фе...
